發(fā)布時間：2024-05-16 04:34

　　目的:闡明DNA損傷調節(jié)自噬相關蛋白1(DNA damage-regulated autophagy modulator1,DRAM1)在中腦多巴胺能細胞系MES 23.5的過表達對魚藤酮毒性損傷的保護作用,闡明DRAM1在過表達時對多巴胺能細胞內自噬的影響,進而揭示DRAM1在魚藤酮PD模型中影響α-突觸核蛋白(α-synuclein)蓄積以及多巴胺能神經元生存的分子機制。方法:通過對細胞存活率的檢測選擇合適的魚藤酮濃度和作用時間,構建魚藤酮所致帕金森細胞模型。Western blot法檢測α-突觸核蛋白和DRAM1的蛋白水平,RT-PCR法檢測α-synuclein和DRAM1的m RNA水平。免疫細胞化學實驗觀察魚藤酮對MES23.5細胞內α-突觸核蛋白聚集的影響。構建魚藤酮所致帕金森大鼠模型,檢測模型大鼠中腦部位α-突觸核蛋白和DRAM1的蛋白水平。構建DRAM1過表達模型后使用魚藤酮,觀察細胞存活率的降低情況以及細胞形態(tài)學變化。構建DRAM1干擾模型后使用魚藤酮,觀察細胞存活率的降低情況。魚藤酮作用MES23.5,Western blot法檢測p62和LC3 II蛋白水平變化...

【文章頁數】：80 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1.1魚藤酮通過不同的途徑損傷神經細胞[4]

圖1.1魚藤酮通過不同的途徑損傷神經細胞[4]自噬過程及其分子調控噬是40多年前學者在電鏡下觀察到的一種細胞結構,然而,直到最近幾漸認識到自噬的重要功能,尤其是2005年Science雜志將細胞自噬評為技熱點研究之首,自噬相關研究得以迅速進展。自噬通過降解細胞內小....

圖1.2自噬障礙與帕金森疾病的關系[56]

54圖1.2自噬障礙與帕金森疾病的關系[56]α突觸核蛋白在生理調節(jié)下會經由自噬溶酶體途徑（autophagy-lysosomepathw泛素蛋白酶體途徑（ubiquitin-proteasomesystem，UPS）降解。實驗證明，純化觸核蛋白與分離的溶酶體共培養(yǎng)時，能夠....

圖1.3TP53下游基因DRAM1參與自噬與凋亡過程[61]

TP53下游基因DRAM1參與自噬與凋亡過路中的作用信號通路中的作用學的預測和免疫熒光研究，認為Dp53和DRAM1可以夠誘導自噬體。Crighton還發(fā)現DRAM1作為一種體通常是在自噬的后期階段發(fā)揮降解給其他啟動自噬的蛋白質，也可能是[64,65]。目前，....

圖1.4DRAM1增強溶酶體的酸化[64]

活需要一個合適的pH環(huán)境，目前廣泛認為質子泵的激活能夠維持溶酶體內較低的pH環(huán)境，而ATP依賴的質子泵能幫組將氫質子轉移入細胞器。所以氫質子泵對于維持細胞器內pH環(huán)境的穩(wěn)定有重要意義。溶酶體膜上嵌有ATP依賴的質子運輸泵，它能將H+泵入溶酶體內，使得溶酶體內的....

本文編號：3974698