發(fā)布時(shí)間：2024-05-29 01:33

　　目的：發(fā)現(xiàn)新型調(diào)血脂藥物的先導(dǎo)化合物,進(jìn)一步探討該化合物體外對(duì)脂代謝的調(diào)節(jié)作用及機(jī)制。方法：本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所國(guó)家新藥(微生物)篩選實(shí)驗(yàn)室前期工作中建立的人ABCA1和CLA-1表達(dá)上調(diào)劑篩選模型篩選獲得能上調(diào)ABCA1和CLA-1表達(dá)的化合物；利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法和蛋白質(zhì)印跡法研究化合物對(duì)目的基因及蛋白的作用；應(yīng)用核受體PPAR激活實(shí)驗(yàn)及PPARa/γ拮抗劑實(shí)驗(yàn)考察化合物對(duì)目的基因調(diào)節(jié)的機(jī)制；利用巨噬細(xì)胞泡沫化的定性及定量實(shí)驗(yàn)、熒光標(biāo)記的膽固醇外排實(shí)驗(yàn)、前脂肪細(xì)胞的誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)等考察化合物的體外調(diào)節(jié)脂代謝的作用。結(jié)果：對(duì)中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所國(guó)家新藥(微生物)篩選實(shí)驗(yàn)室化合物庫(kù)中的20000個(gè)化合物應(yīng)用人ABCA1和CLA-1表達(dá)上調(diào)劑篩選模型進(jìn)行篩選,發(fā)現(xiàn)化合物E23869上調(diào)ABCA1的活性為196%,E23869上調(diào)CLA-1的活性為198%；RT-PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在小鼠單核巨噬細(xì)胞RAW264.7和人正常肝細(xì)胞L02中,E23869均能在mRNA及蛋白表達(dá)水平上顯著上調(diào)ABCA1、SR-BI/CLA-1及AB...

【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
縮略語
中文摘要
ABSTRACT
前言
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 調(diào)血脂藥物的研究現(xiàn)狀
    1.2 ABCA1概述
        1.2.1 ABCA1的結(jié)構(gòu)
        1.2.2 ABCA1基因的表達(dá)與調(diào)控
        1.2.3 ABCA1的功能
    1.3 SR-BI概述
        1.3.1 SR-BI的結(jié)構(gòu)
        1.3.2 SR-BI基因的分布及調(diào)控
        1.3.3 SR-BI的功能
    1.4 ABCG1概述
        1.4.1 ABCG1的結(jié)構(gòu)及分布
        1.4.2 ABCG1的功能
第二章 ABCA1和CLA-1表達(dá)上調(diào)劑的的高通量篩選
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞株
        2.1.2 細(xì)胞培養(yǎng)基
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 耗材
        2.1.5 主要儀器
        2.1.6 主要軟件
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2.2 ABCA1和CLA-1表達(dá)上調(diào)劑的篩選
        2.2.3 ABCA1和CLA-1表達(dá)上調(diào)劑的量效關(guān)系測(cè)定
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 應(yīng)用ABCA1和CLA-1表達(dá)上調(diào)劑篩選模型的篩選結(jié)果
        2.3.2 化合物E23869在ABCA1和CLA-1表達(dá)上調(diào)劑篩選模型中的量效關(guān)系曲線
第三章 化合物E23869的體外活性測(cè)定
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 細(xì)胞株
        3.1.2 細(xì)胞培養(yǎng)基
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 抗體
        3.1.5 Real-time熒光定量引物
        3.1.6 主要儀器
        3.1.7 主要軟件
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)胞的培養(yǎng)
        3.2.2 MTT實(shí)驗(yàn)
        3.2.3 蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)化合物對(duì)目的基因蛋白表達(dá)水平的影響
        3.2.4 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)化合物對(duì)目的基因mRNA表達(dá)水平的影響
        3.2.5 化合物對(duì)巨噬細(xì)胞泡沫化及細(xì)胞內(nèi)總膽固醇的影響
        3.2.6 化合物對(duì)膽固醇外排實(shí)驗(yàn)的影響
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 化合物E23869的細(xì)胞毒性試驗(yàn)
        3.3.2 化合物E23869對(duì)小鼠單核巨噬細(xì)胞株Raw264.7目的基因蛋白水平的影響
        3.3.3 化合物E23869對(duì)小鼠單核巨噬細(xì)胞株Raw264.7目的基因mRNA水平的影響
        3.3.4 化合物E23869對(duì)人正常肝細(xì)胞株L02目的基因蛋白水平的影響
        3.3.5 化合物E23869對(duì)人正常肝細(xì)胞株L02目的基因mRNA水平的影響
        3.3.6 化合物E23869對(duì)巨噬細(xì)胞泡沫化的影響
        3.3.7 化合物E23869對(duì)巨噬細(xì)胞內(nèi)的膽固醇流出的影響
第四章 活性化合物E23869的機(jī)制研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 細(xì)胞株
        4.1.2 菌株
        4.1.3 質(zhì)粒
        4.1.4 培養(yǎng)基
        4.1.5 主要試劑
        4.1.6 主要軟件
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 細(xì)胞的培養(yǎng)
        4.2.2 活性化合物對(duì)核受體的激動(dòng)活性作用
        4.2.3 蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)活性化合物對(duì)目的基因蛋白表達(dá)水平的機(jī)制研究
        4.2.4 活性化合物對(duì)小鼠前脂肪細(xì)胞株3T3-L1的誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 活性化合物E23869對(duì)PPARα/PPARγ體外轉(zhuǎn)錄激活的作用
        4.3.2 活性化合物E23869對(duì)目的基因蛋白表達(dá)水平的機(jī)制研究
        4.3.3 活性化合物E23869對(duì)前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化的影響
第五章 綜合結(jié)論
    5.1 實(shí)驗(yàn)討論
        5.1.1 靶向RCT的新型藥物的篩選
        5.1.2 E23869的體外分子藥理學(xué)研究
        5.1.3 E23869的機(jī)制研究
        5.1.4 展望
    5.2 綜合結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3983888