發(fā)布時間：2025-01-07 00:12

　　 目的:測定聚乙二醇化重組人促紅素(PEG-EPO)中不同修飾位點的修飾率。方法:將重組促紅素(EPO)及PEG-EPO樣品分別用Lys-C蛋白酶進行酶切,在含0.1%三氟乙酸的流動相體系下液質聯用測定液質肽圖;通過質譜鑒定各肽段,在215 nm波長采集的肽圖中積分計算各肽段的峰面積百分比;根據EPO及PEG-EPO肽圖中對應肽段峰面積百分比的變化,利用軟件計算各位點的修飾率。結果:所建立的方法成功計算出PEG-EPO中9個位點的修飾率。該方法還用于3家企業(yè)的產品比較,結果顯示:3家企業(yè)的產品在PEG修飾方面的總體趨勢一致,但在個別位點存在修飾率的差異,比如N-末端和Lys45。結論:該方法可用于PEG-EPO制品的常規(guī)質量控制,以及不同企業(yè)產品的比對研究。

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【部分圖文】：

圖2 修飾率計算軟件界面

基于上述公式對各位點的修飾率進行擬合，擬合結果應符合殘差和趨近于零。在以上邏輯下，自行設計自動評估軟件進行擬合計算。該軟件（內部使用）利用ViualFoxpro98編程語言編寫，所用解析方法為最小二乘法，通過順序搜索和結果分析控制將解析終點誤差控制在2%以內，解析結果與預設理....

圖3 3個廠家的PEG-EPO產品修飾情況比較

采用上述方法，分別對3個廠家（每家3批）的產品進行了PEG修飾率的測定，結果見圖3。測定結果顯示，9批產品在PEG修飾方面的大體趨勢是一致的：N-末端修飾比例最高，其次是Lys52,Lys152修飾比例最低；不同廠家的產品也存在一定的區(qū)別，如廠家3的產品在N-末端的修飾比例相對更....

本文編號：4024202