發(fā)布時間：2020-07-06 20:20

【摘要】：涼粉草(Mesona blumes)為唇形科植物,具有消暑、清熱、涼血和解毒的功能。民間常用其莖加水煎煮,再加稀淀粉制成凍(俗稱“涼粉”)食用,是消暑解渴的極佳食品。多糖是涼粉草中的主要活性物質,具有良好的流變學行為和凝膠性,并且具有清除自由基的功效。然而對于涼粉草多糖(MBP)凝膠機理以及與其他大分子復配體系的探究及機理尚不清楚,對于涼粉草多糖體內護肝活性的探究鮮有報道。因此,本論文先對涼粉草多糖進行提取理化性質測定,并對涼粉草多糖和涼粉草多糖-大豆分離蛋白復合凝膠的凝膠特性,相互作用力及微觀結構進行分析,揭示了其凝膠形成機理;此外,評價了涼粉草多糖的體內護肝活性。主要結果如下:1.涼粉草多糖經過0.5%的碳酸鈉水溶液提取,經過醇沉,凍干后對其理化性質進行分析。結果表明:涼粉草多糖包括81.12%的總糖含量和14.07%的蛋白質,其中總糖包含52.45%的糖醛酸和28.67%的中性糖。高效凝膠滲透色譜結果表明,涼粉草多糖的分子量約為3.75×10~5 Da。高效陰離子交換色譜結果表明,涼粉草多糖是由鼠李糖(Rha),阿拉伯糖(Ara),半乳糖(Gal),葡萄糖(Glc),木糖(Xyl)和葡萄糖醛酸(Gala)組成的,分子比為1.38:1.64:2.16:4.90的雜多糖。其次,涼粉草多糖的紅外光譜在4000-400cm~(-1)范圍內檢測到了碳水化合物特定指紋吸收峰。最后,熱重分析的結果表明,涼粉草多糖具有耐熱性,當溫度升高到600°C時,其質量剩余20.07%。2.探究了鹽離子對涼粉草多糖及涼粉草多糖和大豆分離蛋白復配體系的流變凝膠特性的影響。結果表明:涼粉草多糖濃度在3%時,表現出弱凝膠特性,鈣離子(3-9 mM)的加入可以顯著提高涼粉草多糖的凝膠特性(P0.05)。此外,鈣離子也顯著提高了涼粉草多糖膠的熱分解溫度,并且促使涼粉草多糖膠的微觀結構表面更光滑。鹽離子加入對復合膠也有顯著影響。結果表明,鹽離子在低濃度下(0.005-0.01 M),可以顯著提高復合膠的儲能模量和損耗模量。此外,復合膠的凝膠強度和持水性也顯著增加。然而,當鹽離子濃度升高到0.015M時,會顯著減弱其凝膠特性。3.采用松弛模量的流變學方法對涼粉草的凝膠機理進行分析,其結果表明,氫鍵作用在凝膠形成過程中起到主要作用,此外,鈣和涼粉草多糖上的羧基形成的“鈣橋”在凝膠形成過程中起到重要作用。最后,靜電作用的存在也促進了凝膠網絡形成,但不是主要作用。其次,我們對復合膠的相互作用力也進行了分析,其結果表明,疏水作用,靜電作用和二硫鍵作用是維持凝膠網絡結構的主要力量。涼粉草多糖作為具有廣泛生物活性的多糖凝膠劑有助于大豆分離蛋白凝膠的創(chuàng)新應用。4.將70只昆明小鼠(18-22 g)適應7天后,將小鼠隨機分成7組,每組隨機選擇10只小鼠。正常組;CC1_4組;MBP組(100,200,300 mg/kg體重);聯苯雙酯滴丸藥物組(BD)(200 mg/kg體重);BD和MBP混合組(BM)(100+100 mg/kg體重)。MBP組,BD組和BM組的小鼠每天口服給予上述濃度的多糖和BD。正常組和CC1_4組給予相同量的生理鹽水。所有小鼠連續(xù)灌胃18天后,除正常組外的所有小鼠均給予0.5%CCl_4/花生油混合物(0.1 mL/10 g),而正常組僅接受花生油。2 h后,所有動物禁食但給予足夠的水。12 h后,所有小鼠眼球取血然后處死。實驗結束后,對小鼠的血清和肝臟進行分析。結果表明:給予MBP可顯著降低CCl_4處理引起的血清中丙氨酸氨基轉移酶(ALT)和天冬氨酸氨基轉移酶(AST)的水平(P0.05)。與CCl_4誘導的急性肝損傷模型相比,中和高劑量MBP治療(200 mg/kg體重,300 mg/kg體重)不僅顯著提高抗氧化酶(超氧化物歧化酶,SOD)的水平和非酶抗氧化劑(谷胱甘肽,GSH)水平,同時也顯著降低CCl_4處理引起的肝組織中的脂質過氧化水平。此外,中高劑量的MBP顯著增加TNF-α和IL-1β水平(P0.05)。因此,本研究表明MBP對CCl_4誘導的小鼠急性肝損傷具有保護作用。
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

圖 1.1 本文研究主要技術路線.Fig. 1.1 Major technology routes of this study.1.3.4 主要創(chuàng)新點（1）用松弛模量的方法測定涼粉草多糖形成凝膠過程中的相互作用，并確立了涼粉草多糖形成凝膠的可能的機制。（2）利用涼粉草多糖和大豆蛋白形成復合凝膠，并對其凝膠機理進行了探究。為涼粉草多糖凝膠的利用提供了新思路，有利于擴大了涼粉草多糖凝膠特性的應用范圍。（3）基于涼粉草多糖良好的抗氧化活性建立了涼粉草多糖保護四氯化碳誘導的小鼠急性肝損傷的模型，為涼粉草多糖的功能特性的開發(fā)與應用提供理論基礎。

2.4.1 總糖測定以葡萄糖為對照品，以吸光度為縱坐標，標準品濃度為橫坐標，作標準曲線如圖2-1，求回歸方程。標準曲線的回歸方程為y=11.9537x+0.00245，R2=0.99957，在（0.02~0.1）mg/mL 范圍內線性關系良好。涼粉草多糖所測吸光度帶入回歸方程，得到中性糖含量為 28.67 ± 0.14%。2.4.2 糖醛酸含量以半乳糖醛酸為對照品，以吸光度為縱坐標，標準品濃度為橫坐標，作標準曲線如圖 2-2，求回歸方程。標準曲線的回歸方程為 y=7.47964x+0.01038，R2=0.99001

Fig. 2-2 Uronic acid standard curve.2.4.3 蛋白質含量以牛血清蛋白為對照品，以吸光度為縱坐標，標準品濃度為橫坐標，作標準曲線如圖2-3，求回歸方程。標準曲線的回歸方程為y=6.7532x+0.0658，R2=0.99119，在（0.02~0.1）mg/mL 范圍內線性關系良好。涼粉草多糖所測吸光度帶入回歸方程，得到蛋白質含量為 14.07 ± 0.90%。

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本文編號：2744087