發(fā)布時間：2020-07-07 01:18

【摘要】：目的:本研究采用脂質(zhì)組學(xué)分析方法,觀察去卵巢大鼠與正常大鼠血漿的脂質(zhì)代謝特征,篩選與絕經(jīng)期大鼠有關(guān)的差異脂質(zhì)代謝物,通過脂質(zhì)代謝物相對含量的變化,分析絕經(jīng)期大鼠體內(nèi)的脂質(zhì)代謝狀態(tài)以及與老年性疾病的聯(lián)系,從代謝物含量變化和代謝通路深入研究清心滋腎湯對絕經(jīng)期的脂質(zhì)代謝調(diào)控,期望從脂代謝物水平上揭示清心滋腎湯對絕經(jīng)綜合征調(diào)控機制,為進一步開發(fā)利用清心滋腎湯奠定理論基礎(chǔ)。方法:將4月齡雌性SD大鼠60只,隨機分為空白組和去卵巢組,空白組行假手術(shù)即只打開盆腔,不切除卵巢;去卵巢組均行“雙側(cè)卵巢切除術(shù)”,通過大鼠陰道脫落細胞涂片觀察造模結(jié)果。術(shù)后將去卵巢大鼠隨機分為5組:模型組(M組)、清心滋腎湯低劑量組(D組)、清心滋腎湯中劑量組(Z組)、清心滋腎湯高劑量組(G組)、莉芙敏組(Y組),加上空白組(K組),共6組。分別灌胃4周,末次給藥禁食24小時后,用10%水合氯醛按照每公斤體重0.35ml對大鼠進行麻醉,行頸動脈取5ml血至采血管,離心機以3000轉(zhuǎn)/分速度離心20分鐘,取血清,備用。采用超高效液相色譜-線性離子阱/靜電場軌道阱結(jié)合高分辨質(zhì)譜法(UPLC/LTQ-Orbitrap-MS)對各組血漿進行檢測。通過主成分分析(PCA)、正交-偏最小二乘法分析(OPLS-DA)以及差異倍數(shù)(FC)尋找模型組與空白組之間的差異脂質(zhì)代謝物,根據(jù)檢出的精確分子質(zhì)量和質(zhì)合比信息,同時結(jié)合碎片離子信息,搜索chemspider數(shù)據(jù)庫,完成代謝產(chǎn)物的鑒定,將所得的差異代謝物輸入KEGG數(shù)據(jù)庫查找相關(guān)代謝通路。運用多元統(tǒng)計分析比較這些差異脂質(zhì)代謝物在清心滋腎湯各劑量組及莉芙敏組大鼠體內(nèi)相對含量是否有變化,由此推測清心滋腎湯對去卵巢大鼠的治療作用機制。結(jié)果:1.采用PCA方法對模型組與空白組大鼠樣本建模,大部分樣本集中分布于散點圖的橢圓形95%置信區(qū))區(qū)域內(nèi),有一定的分離趨勢,但仍存在交叉重疊,進一步建立OPLS-DA模型,參數(shù)分別為:血漿(正離子模型):R2Y=0.996,Q2=0.789;血漿(負離子模型):R2Y=0.999,Q2=0.694。R2Y表示模型的解釋率,Q2表示模型的預(yù)測率。上述參數(shù)可以看出本實驗建立的模型有較高的可靠性,OVX大鼠模型建立成功。2.對模型組和空白組大鼠血漿進行脂質(zhì)組學(xué)分析,以O(shè)PLS-DA模型中VIP1及單變量統(tǒng)計分析P0.05的脂質(zhì),并計算變異倍數(shù)(FC)1.2,作為顯著性差異脂質(zhì)。實驗揭示了與絕經(jīng)綜合征相關(guān)的差異代謝物,血漿中顯著性差異脂質(zhì)一共9類,共76種脂質(zhì)化合物。包括:12種神經(jīng)酰胺(Cers),29種鞘磷脂(SMs),5種甘油三酯(TGs),5種溶血磷脂酰膽堿(LPCs),2種脂肪酸(FAs),1種血小板活化因子(PAF),其相對含量上升,與空白組對比(p0.05);4種磷脂酰甘油(PGs),4種磷脂酰絲氨酸(PSs),14種甘油二酯(DGs),其相對含量下降,與空白組對比(p0.05)。3.將差異脂質(zhì)代謝物進行代謝通路查詢后發(fā)現(xiàn),有6條代謝通路與絕經(jīng)綜合征相關(guān),包括:甘油磷脂代謝,鞘脂代謝,甘油酯代謝,膽固醇代謝,醚脂代謝和不飽和脂肪酸合成。4.通過比較清心滋腎湯給藥前后大鼠的脂質(zhì)代謝物相對含量的變化,發(fā)現(xiàn)清心滋腎湯能夠調(diào)控多個與絕經(jīng)綜合征有關(guān)的脂質(zhì)差異代謝物的紊亂。鑒定出了清心滋腎湯干預(yù)去卵巢大鼠后血漿代謝相關(guān)的5類差異脂質(zhì),能夠上調(diào)2種指標(biāo),下調(diào)3種指標(biāo),以上指標(biāo)相對含量的差異與模型組相比存在統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05)。結(jié)論:1.UPLC/LTQ-Orbitrap-MS代謝組學(xué)能夠初步區(qū)分正常大鼠與絕經(jīng)期大鼠兩種不同的脂代謝狀態(tài)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)有76種差異脂質(zhì)化合物的相對含量變化與絕經(jīng)綜合征脂代謝紊亂相關(guān),這些代謝物的水平變化可作為與絕經(jīng)相關(guān)的老年性退化性疾病的預(yù)測標(biāo)記物。2.去卵巢大鼠存在甘油磷脂代謝,鞘脂代謝,甘油酯代謝,膽固醇代謝,醚脂代謝和不飽和脂肪酸合成的紊亂。3.清心滋腎湯能一定程度調(diào)節(jié)絕經(jīng)綜合征所引起的脂質(zhì)紊亂狀態(tài),主要通過調(diào)節(jié)甘油磷脂代謝、鞘脂代謝以及甘油酯代謝發(fā)揮治療作用。4.通過清心滋腎湯給藥后這些代謝物相對含量的變化以及代謝通路的調(diào)控,揭示了清心滋腎湯一個重要的治療機制是預(yù)防并延緩絕經(jīng)后心腦血管疾病、阿茲海默癥、糖尿病以及代謝性疾病的發(fā)生,為進一步的藥理學(xué)研究提供思路。
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

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圖２－６．Ｄ－Ｍ兩組的ＰＣＡ得分圖（ＥＳＩ邋－）逡逑３．２．３邋ＥＳＩ＋ＥＳ卜ＺＭＰＣＡ

圖１０．邋Ｇ－Ｍ兩組的ＰＣＡ得分圖（ＥＳＩ邋－）逡逑

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本文編號：2744421