發(fā)布時(shí)間：2020-11-22 09:14

　　 目的本研究通過(guò)觀察補(bǔ)腎活血方預(yù)治療對(duì)高齡卵巢儲(chǔ)備功能下降小鼠促排卵后卵泡發(fā)育以及ERK信號(hào)的作用,為中醫(yī)藥改善高齡不孕患者的卵泡發(fā)育和生殖功能等方面提供理論依據(jù)。方法本研究隨機(jī)抽取30只年輕小鼠(40日齡),作為年輕空白對(duì)照組,將實(shí)驗(yàn)的60只老齡小鼠(11月齡)再隨機(jī)分為兩組:老齡空白對(duì)照組與補(bǔ)腎活血方組,每組各30只。根據(jù)人、小鼠的體表面積換算法,補(bǔ)腎活血方組將方藥的每日成人服用劑量轉(zhuǎn)算為小鼠的每日給藥劑量,其灌胃藥量為每10g體重予0.2ml藥液量,每日下午1次。年輕空白對(duì)照組與老齡空白對(duì)照組分別灌等體積的自來(lái)水入胃,共給藥14天。灌胃結(jié)束后予注射用尿促性腺激素10U/只,36h后各組小鼠隨機(jī)取其中20只小鼠的卵巢,經(jīng)HE染色后鏡下觀察小鼠卵母細(xì)胞的發(fā)育情況;免疫熒光染色檢測(cè)小鼠卵泡顆粒細(xì)胞Ki67表達(dá)水平來(lái)觀察顆粒細(xì)胞增殖以及通過(guò)免疫印跡法檢測(cè)小鼠卵巢的ERK及p-ERK蛋白水平。注射尿促性腺激素48h后,給予每組剩余10只小鼠注射人絨毛膜促性腺激素20U/只,14 h后斷頸處死小鼠,于輸卵管壺腹部取出卵巢所排出的卵子,計(jì)算比較各組小鼠排卵的數(shù)目差異并經(jīng)免疫熒光染色檢測(cè)小鼠卵丘復(fù)合物顆粒細(xì)胞Ki67表達(dá)水平來(lái)觀察顆粒細(xì)胞增殖。結(jié)果(1)補(bǔ)腎活血方對(duì)高齡卵巢儲(chǔ)備功能下降小鼠促排后排卵的影響年輕空白對(duì)照組小鼠促排后排出卵子的平均數(shù)目為28.20±2.92(??±s);老齡空白對(duì)照組小鼠促排后排出卵子的平均數(shù)目為4.45±1.94;補(bǔ)腎活血方組小鼠促排后排出卵子的平均數(shù)目為11.3±3.13。其中老齡空白對(duì)照組與年輕空白對(duì)照組比較,小鼠促排后排出的卵子數(shù)目明顯減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);而補(bǔ)腎活血方組與老齡空白對(duì)照組比較,排出的卵子數(shù)目增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。(2)補(bǔ)腎活血方對(duì)高齡卵巢儲(chǔ)備功能下降小鼠卵泡發(fā)育的影響老齡空白對(duì)照組與年輕空白對(duì)照組比較,促排后鏡下可見小鼠卵巢內(nèi)竇卵泡數(shù)及正常次級(jí)卵泡數(shù)明顯減少(P0.01);而補(bǔ)腎活血方組與老齡空白對(duì)照組比較,竇卵泡數(shù)及正常次級(jí)卵泡數(shù)增加明顯(P0.05)。(3)補(bǔ)腎活血方對(duì)高齡卵巢儲(chǔ)備功能下降小鼠卵泡顆粒細(xì)胞及卵丘復(fù)合物顆粒細(xì)胞增殖的影響年輕空白對(duì)照組小鼠卵泡顆粒細(xì)胞Ki67平均陽(yáng)性率為90.11±3.55(??±s),卵丘復(fù)合物顆粒細(xì)胞Ki67的平均陽(yáng)性率為93.19±2.16;老齡空白對(duì)照組小鼠卵泡顆粒細(xì)胞Ki67平均陽(yáng)性率為35.30±3.03,卵丘復(fù)合物顆粒細(xì)胞Ki67的平均陽(yáng)性率為33.07±3.76;補(bǔ)腎活血方組小鼠卵泡顆粒細(xì)胞Ki67平均陽(yáng)性率為64.01±3.35,卵丘復(fù)合物顆粒細(xì)胞Ki67的平均陽(yáng)性率為66.84±3.09。老齡空白對(duì)照組與年輕空白對(duì)照組比較,小鼠卵泡顆粒細(xì)胞及卵丘復(fù)合物顆粒細(xì)胞Ki67蛋白表達(dá)水平明顯降低(P0.01);而補(bǔ)腎活血方組與老齡空白對(duì)照組比較,Ki67蛋白表達(dá)水平增加明顯(P0.01)。(4)補(bǔ)腎活血方對(duì)高齡卵巢儲(chǔ)備功能下降小鼠卵母細(xì)胞ERK1/2的激活作用三組實(shí)驗(yàn)小鼠卵巢均有ERK1/2蛋白的表達(dá),且表達(dá)的水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。三組亦均有磷酸化ERK1/2蛋白的表達(dá),其中老齡空白對(duì)照組與年輕空白對(duì)照組比較,小鼠卵巢磷酸化ERK1/2蛋白相對(duì)表達(dá)量降低明顯(P0.01);而補(bǔ)腎活血方組與老齡空白對(duì)照組比較,小鼠卵巢磷酸化ERK1/2蛋白相對(duì)表達(dá)量增加明顯(P0.05)。結(jié)論(1)高齡卵巢儲(chǔ)備功能下降小鼠卵母細(xì)胞發(fā)育障礙,卵泡顆粒細(xì)胞及卵丘復(fù)合物顆粒細(xì)胞的增殖能力下降。(2)補(bǔ)腎活血方可改善高齡卵巢儲(chǔ)備功能下降小鼠卵泡發(fā)育,提高卵泡顆粒細(xì)胞及卵丘復(fù)合物顆粒細(xì)胞的增殖能力。(3)補(bǔ)腎活血方能使老年小鼠卵巢組織p-ERK1/2蛋白水平增高,提示該中藥方能夠促進(jìn)高齡卵巢儲(chǔ)備功能下降小鼠卵巢ERK1/2蛋白的激活。(4)補(bǔ)腎活血方改善年齡相關(guān)卵巢儲(chǔ)備功能下降小鼠卵泡發(fā)育的作用機(jī)制可能與促進(jìn)小鼠卵泡顆粒細(xì)胞的增殖和ERK1/2磷酸化的激活有關(guān)。
【學(xué)位單位】：安徽中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

A.年輕空白對(duì)照組 B.老齡空白對(duì)照組 C.補(bǔ)腎活血方組圖 1. 三組小鼠促排后卵巢排出的卵子Fig 1 Eggs of three groups that were excreted by ovaries after ovulation

A.年輕空白對(duì)照組 B.老齡空白對(duì)照組 C.補(bǔ)腎活血方組圖 3. 三組小鼠卵巢細(xì)胞的 HE 切片染色Fig 3 The morphological changes of cells in mouse ovaries were observed by Hstaining

<0.01）；而補(bǔ)腎活血方組與老齡空白對(duì)照組比較，排出的卵子數(shù)目增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P <0.01）。3.2 HE 染色觀察各組小鼠各級(jí)卵泡的形態(tài)學(xué)改變A.年輕空白對(duì)照組 B.老齡空白對(duì)照組 C.補(bǔ)腎活血方組圖 3. 三組小鼠卵巢細(xì)胞的 HE 切片染色Fig 3 The morphological changes of cells in mouse ovaries were observed by Hstaining
【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 佟雅婧;補(bǔ)腎活血法治療排卵障礙性不孕系統(tǒng)評(píng)價(jià)再評(píng)價(jià)及子代發(fā)育臨床研究[D];中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院;2018年

本文編號(hào)：2894468