發(fā)布時間：2024-07-09 06:00

　　目的結合體內實驗和體外實驗探討不同提取方案的蒿鱉養(yǎng)陰軟堅方對酒精性肝纖維化的作用機制,并探討其通過激活Nrf2通路誘導下游抗氧化反應蛋白γ-GCS的表達,而抑制酒精性肝纖維化,進一步推動鱉養(yǎng)陰軟堅方成功應用于臨床,為眾多酒精性肝纖維化患者提供更為健康、有效、副作用小的防治藥物。本課題組結合體內、外兩大實驗部分,根據(jù)不同提取方案的復方給藥后,分析大鼠肝組織中膠原蛋白含量,觀察乙醛刺激后的LX-2細胞生長、增殖的情況,研究酒精性肝纖維化大鼠肝組織中以及乙醛刺激后的LX-2細胞中Nrf2/γ-GCS通路中主要蛋白Nrf2、γ-GCS的表達。方法1、從軍事科學院購買健康Wistar大鼠體重在200²40g的共80只,雌性和雄性各占一半。每日灌胃相應濃度酒精并輔助大鼠皮下注射40%CCL4-花生油以及添加高脂飼料進行酒精性肝纖維化模型造模。將大鼠按體重隨機區(qū)組分組法分為完全水提低劑量組(2.59g.kg-1.d-1)、完全水提高劑量組(8.2g.kg-1.d-1)、先水后醇95%低劑量組(2.59g.kg-1.d-1)、先水后醇95%高劑量組(8.2g.kg-1.d-1)、...

【文章頁數(shù)】：146 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1蛋白定量標準曲線

⑦設定酶標儀波長為570nm，測定96孔板各孔的吸光度值，根據(jù)蛋白標準品濃度與所檢測的OD值繪制標準曲線，并利用標準曲線及其公式，根據(jù)樣品的OD值計算出樣品的總蛋白濃度以及電泳上樣體積。見圖1。表1蛋白定量測定的標準曲線蛋白濃度(mg/mL)00.0250.050.....

圖2Nrf2蛋白免疫組化染色結果(×400)

實驗結果3.1體內實驗結果3.1.1粉末提取方案的蒿鱉養(yǎng)陰軟堅方對酒精性肝纖維化模型肝組織中的免疫組化的影響3.1.1.1Nrf2蛋白免疫組化染色結果ABC

圖3γ-GCS蛋白免疫組化染色結果(×400)

正常組在視野范圍內未見棕黃色染色，即無Nrf2蛋白表達。模型組在胞漿內均可見棕黃色染色，但胞核內未見其表達。中劑量組胞核內陽性染色分布較少，多見炎癥細胞浸潤。高劑量組陽性染色多數(shù)在胞核，胞漿有少量分布，間質細胞也有少量分布。秋水仙堿組在胞漿和胞核內均可見棕黃色染色，以肝細胞核....

圖4肝組織羥脯氨酸Hyp標準曲線

正常組在視野范圍內未見棕黃色染色，即無γ-GCS蛋白表達。模型組在胞漿內均可見棕黃色染色，但胞核內未見其表達，可見大量竇內皮細胞、間質細胞增生。粉末中、高劑量組在胞漿、胞核內均可見棕黃色染色，可見炎癥細胞浸潤。但兩個劑量組染色差別不大。秋水仙堿組在胞漿和胞核內均可見棕黃色染色....

本文編號：4004506