發(fā)布時間：2018-08-26 20:40

【摘要】：背景與目的本研究旨在探討肺癌中miR-218的表達,研究miR-218在肺癌細胞中的功能及其可能的分子機制。方法應用實時熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測15例肺癌組織和15例癌旁組織中miR-218的表達。在肺癌細胞A549中轉染miR-218的抑制物(Anti-miR-218),在肺癌細胞HCC4006中轉染miR-218的模擬物后,用Transwell實驗檢測細胞的遷移侵襲能力的變化。用Targetscan和MiRanda軟件預測miR-218的可能靶點,轉染miR-218的抑制物及模擬物后用qRT-PCR和Western blot檢測Robo1的mRNA和蛋白表達水平。用雙熒光素酶報告基因方法鑒定miR-218和Robo1的調(diào)控關系。用Anti-miR-218、miR-218模擬物或陰性對照與Si-Robo1或Si-NC同時轉染細胞,應用Transwell實驗檢測轉染后細胞的侵襲遷移能力的變化。結果與癌旁組織比較,肺癌組織中miR-218在肺癌組織中表達水平顯著降低(P0.01)。在A549細胞中轉染miR-218的抑制物,能夠顯著降低miR-218的表達,促進了細胞的遷移侵襲。在HCC4006中轉染miR-218的模擬物能夠顯著提高miR-218的表達,同時抑制了細胞的遷移侵襲能力。利用生物信息學預測出在Robo1的3′UTR區(qū)有miR-218的結合位點,雙熒光素酶報告基因實驗進一步證實miR-218能夠調(diào)控Robo1的轉錄活性。抑制miR-218能夠提高Robo1的表達;過表達miR-218顯著降低Robo1的表達,且miR-218能夠通過調(diào)控Robo1影響細胞的遷移侵襲。結論 MiR-218在肺癌組織中呈現(xiàn)低表達狀態(tài),miR-218可能是通過抑制Robo1的表達抑制肺癌細胞侵襲遷移。
[Abstract]:Background & AIM this study aims to investigate the expression of miR-218 in lung cancer and the function of miR-218 in lung cancer cells and its possible molecular mechanism. Methods Real-time quantitative PCR (qRT-PCR) was used to detect the expression of miR-218 in 15 lung cancer tissues and 15 paracancerous tissues. After transfection of miR-218 inhibitor (Anti-miR-218) into lung cancer cell line A549 and HCC4006 of lung cancer cell, the changes of cell migration and invasion ability were detected by Transwell assay. The possible targets of miR-218 were predicted by Targetscan and MiRanda software. The mRNA and protein expression levels of Robo1 were detected by qRT-PCR and Western blot after transfection of miR-218 inhibitors and mimics. The regulatory relationship between miR-218 and Robo1 was identified by double luciferase reporter gene method. Anti-miR-218,miR-218 analogue or negative control was used to transfect the cells simultaneously with Si-Robo1 or Si-NC. The changes of invasion and migration ability of transfected cells were detected by Transwell assay. Results the expression of miR-218 in lung cancer tissues was significantly lower than that in adjacent tissues (P0.01). Transfection of miR-218 inhibitor in A549 cells significantly reduced the expression of miR-218 and promoted the migration and invasion of A549 cells. The mimics transfected with miR-218 in HCC4006 could significantly increase the expression of miR-218 and inhibit the ability of cell migration and invasion. The binding sites of miR-218 in the 3'UTR region of Robo1 were predicted by bioinformatics. The double luciferase reporter gene experiment further confirmed that miR-218 could regulate the transcriptional activity of Robo1. Inhibition of miR-218 could increase the expression of Robo1, overexpression of miR-218 significantly decreased the expression of Robo1, and miR-218 could influence the migration and invasion of cells by regulating Robo1. Conclusion the low expression of MiR-218 in lung cancer tissues may inhibit the invasion and migration of lung cancer cells by inhibiting the expression of Robo1.
【作者單位】： 解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院;
【分類號】：R734.2

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