發(fā)布時(shí)間：2020-05-05 00:58

【摘要】：目的:胃癌是引起癌癥相關(guān)死亡的主要疾病之一。一些微小核糖核酸(miRNA)已被證實(shí)在胃癌的生長和侵襲中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。本研究主要為了驗(yàn)證miR-638在胃癌中的主要作用,探究其潛在的靶基因,以及發(fā)揮作用的具體機(jī)制。方法:我們通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)(qRT-PCR)檢測了胃癌患者癌與癌旁的組織樣本中miR-638的表達(dá)水平,同樣也檢測了胃癌細(xì)胞株SGC-7901和SC-M1中miR-638的含量。通過細(xì)胞流式技術(shù)檢測分析細(xì)胞周期,運(yùn)用CCK-8檢測細(xì)胞增殖情況,通過Transwell細(xì)胞體外侵襲實(shí)驗(yàn)評估實(shí)驗(yàn)細(xì)胞的侵襲力變化。進(jìn)一步地,使用生物信息技術(shù)預(yù)測miR-638的潛在靶基因,并聯(lián)合q RT-PCR和蛋白免疫印跡法在RNA和蛋白水平對SOX2進(jìn)行了驗(yàn)證。而后采用熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢驗(yàn)miR-638對SOX2是否存在靶向抑制的作用。最后利用SOX2的小干擾RNA驗(yàn)證miR-638、SOX2以及胃癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。結(jié)果:miR-638在胃癌患者癌組織中的表達(dá)水平相較于癌旁組織中是下降的,并且其含量和胃癌TNM分期以及淋巴轉(zhuǎn)移情況呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)性。而在胃癌細(xì)胞的體外實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn),miR-638含量的下降可以促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖能力和侵襲能力、干擾細(xì)胞周期變化。而轉(zhuǎn)錄因子SOX2在胃癌組織中呈高表達(dá),與miRNA-638的含量呈負(fù)相關(guān)性。通過直接與SOX2基因3’末端非翻譯區(qū)結(jié)合,過表達(dá)的miR-638可以有效抑制轉(zhuǎn)錄因子SOX2的表達(dá)。而通過小干擾RNA抑制SOX2的表達(dá)可以在一定程度上逆轉(zhuǎn)miRNA-638下調(diào)對胃癌細(xì)胞株增殖能力和侵襲能力的促進(jìn)作用。結(jié)論:本研究表明miRNA-638在胃癌的發(fā)生發(fā)展中起著抑癌因子的作用,其低表達(dá)會(huì)引起轉(zhuǎn)錄因子SOX2的上調(diào),繼而促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖和侵襲能力。
【圖文】：

癌組織中相對表達(dá)量為 5.637±1.214，而癌旁組織中為 11.220±3.148（p <0.05, 圖1B）。圖 1： miR-638 在胃癌患者組織標(biāo)本中呈下調(diào)趨勢（A）使用 qRT-PCR 檢測 68 例胃癌患者的癌和癌旁組織中的 miR-638 的含量；（B）miR-638 的平均相對表達(dá)水平分析；（C）68 例中有 50 例癌組織中的 miR-638 含量較癌旁組織中顯著降低。（*，P < 0.05）如表格 1 所示，我們對胃癌組織中 miR-638 的相對表達(dá)水平和患者的臨床病例特征做了相關(guān)性分析。先將 68 例樣本所測得的 miR-638 相對表達(dá)量由低到高排序，而后分為中位數(shù)以下的低表達(dá)組和中位數(shù)以上的高表達(dá)組，再將其與臨床特征結(jié)合進(jìn)行

10圖 2：miR-638 具有抑制胃癌細(xì)胞增殖，，誘導(dǎo)細(xì)胞阻滯的作用（A）在胃癌細(xì)胞株中轉(zhuǎn)染 miR-638 模擬物（mimics）、抑制物（inhibitor）以及相應(yīng)的對照分子（mimics-NC, inhibitor-NC）后進(jìn)行轉(zhuǎn)染效率檢測；（B）使用 CCK-8在不同時(shí)間點(diǎn)檢測轉(zhuǎn)染過后的胃癌細(xì)胞活性，繪制生長曲線；（C）使用流式細(xì)胞儀檢測并分析轉(zhuǎn)染 miR-638 模擬物和抑制物對胃癌細(xì)胞周期的影響；（D）對不同周期階段的細(xì)胞數(shù)進(jìn)行比較。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R735.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 陸敏,江悅琴,王瑞年;堿性成纖維細(xì)胞生長因子和血管生成與胃癌發(fā)展的關(guān)系[J];外科理論與實(shí)踐;1998年01期

2 張燕玲;闕曉華;潘樟福;何春梅;;Cox-2、VEGF-C在胃癌發(fā)展中的表達(dá)及其意義[J];放射免疫學(xué)雜志;2010年01期

3 盧忠,盧加蓀;GPDA與胃癌發(fā)展關(guān)系[J];浙江臨床醫(yī)學(xué);2002年05期

4 季沅,高敏;血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子和血管生成與胃癌發(fā)展的關(guān)系[J];蘇州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2001年01期

5 王鑫鑫;彭正;李楊;王華;王立生;陳凜;;沉默信息調(diào)節(jié)因子1在胃癌發(fā)展中的作用機(jī)制研究[J];中國醫(yī)刊;2014年06期

6 騫愛榮,趙俊生,商澎,趙建業(yè),陳建,陳志南;血管內(nèi)皮生長因子和血管生成與胃癌發(fā)展的關(guān)系[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2003年12期

7 陸敏,江悅琴,王瑞年;血管生成與胃癌發(fā)展和預(yù)后的關(guān)系[J];臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志;1998年04期

8 薛紅霞;;谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶P1基因多態(tài)性與胃癌發(fā)展的相關(guān)性研究[J];中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2013年17期

9 謝晶日;張瑜;張冰;;探討Keap1/Nrf-2信號(hào)通路在胃癌發(fā)展和治療中的作用[J];中國中西醫(yī)結(jié)合消化雜志;2017年08期

10 趙劍鋒;陳金坤;林麗娟;蔡清河;鄭龍志;陳建新;;ANGPTL4基因表達(dá)和血管生成與胃癌發(fā)展的關(guān)系[J];中國當(dāng)代醫(yī)藥;2013年08期

相關(guān)會(huì)議論文 前1條

1 馮莉;張浩;董文杰;謝蘊(yùn);吳云林;;LMX1A基因啟動(dòng)子甲基化以及在胃癌發(fā)展中的臨床意義[A];第二十五屆全國中西醫(yī)結(jié)合消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2013年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 殷凱;lncRNA-PVT1/miR-208a-3p/PDCD4調(diào)控網(wǎng)絡(luò)在胃癌發(fā)展中的機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2017年

2 王銘;SENP3調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子Sp1穩(wěn)定性的機(jī)制及其對胃癌發(fā)展的影響[D];上海交通大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前6條

1 楊桃桃;幽門螺桿菌感染引起組蛋白修飾在胃癌發(fā)展不同階段的表達(dá)及其臨床意義[D];鄭州大學(xué);2018年

2 沈瑜;關(guān)于miR-638在胃癌發(fā)展中的作用和機(jī)制的研究[D];蘇州大學(xué);2018年

3 潘昭吉;胃癌間質(zhì)干細(xì)胞中YAP信號(hào)在胃癌發(fā)展過程中的作用[D];江蘇大學(xué);2017年

4 吳莉s

本文編號(hào)：2649260