發(fā)布時間：2024-06-13 19:40

　　目的:細胞凋亡的異常與癌癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),對其機制的探究對于癌癥的治療具有深遠意義。腫瘤壞死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TNF-related apoptosis-inducing ligand,,TRAIL)是一種促凋亡配體,能夠抑制腫瘤生長而不損傷正常宿主細胞。已知棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶ZDHHC蛋白的抑制可促進癌細胞死亡。然而到目前為止,棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶ZDHHC與細胞凋亡之間的關(guān)系尚未被闡明。在此,我們主要對定位于細胞膜上的棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶家族成員ZDHHC5蛋白在癌癥中扮演的角色及其與TRAIL誘導(dǎo)的細胞凋亡之間的相關(guān)性進行探究。方法:首先,使用蛋白棕櫚�；�抑制劑2-溴代棕櫚酸(2‐BP)來處理人骨肉瘤細胞U2OS和宮頸癌細胞He La,利用SYTOX-Green染色法檢測細胞死亡水平,利用Western blot技術(shù)分析TRAIL誘導(dǎo)的細胞凋亡水平及MAPK、NF-κB信號通路激活水平。隨后利用CRISPR-Cas9技術(shù)在U2OS細胞中構(gòu)建ZDHHC5敲除型(ZDHHC5-KO)細胞系,利用SYTOX-Green染色法、熒光細胞活性檢測法(...

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
Abstract
縮略詞表
引言
1 材料
    1.1 實驗主要試劑
    1.2 主要實驗儀器設(shè)備
2 實驗方法
    2.1 質(zhì)粒構(gòu)建
    2.2 細胞的培養(yǎng)
    2.3 CRISP-Cas9構(gòu)建zdhhc5 knock-out細胞系
    2.4 Western blot檢測
    2.5 SYTOX-Green染色法
    2.6 Cell Titer-Glo Assay
    2.7 Annexin V-FITC/PI Staining
    2.8 Luciferase reporter gene assay
3 結(jié)果
    3.1 2BP處理可增加U2OS細胞對TRAIL誘導(dǎo)的細胞凋亡敏感性
    3.2 2BP處理可增加He La細胞對TRAIL誘導(dǎo)的細胞凋亡敏感性
    3.3 2BP處理顯著抑制TRAIL誘導(dǎo)的炎癥信號通路的激活
    3.4 ZDHHC5 缺失增加U2OS細胞對TRAIL誘導(dǎo)的細胞凋亡敏感性
    3.5 TRAIL誘導(dǎo)的炎癥信號通路在ZDHHC5 缺陷細胞中顯著下調(diào)
    3.6 ZDHHC5在Caspase級聯(lián)效應(yīng)的上游發(fā)揮作用
4 討論
參考文獻
綜述 蛋白質(zhì)的棕櫚酰化與癌癥的研究
    參考文獻
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本文編號：3993555