Thlaspi goesingense SAT基因轉(zhuǎn)化埃塞俄比亞芥及對鎳耐性影響研究

發(fā)布時間：2020-11-18 19:17

【摘要】：埃塞俄比亞芥(Brassicacarinata)是十字花科蕓薹屬植物,但在自然條件下與食用甘藍型油菜很難雜交,可望培育成為新的工業(yè)用油料作物用于污染土壤修復。在非超積累植物中超量表達外源的絲氨酸乙酰轉(zhuǎn)移酶(SAT),可以顯著提高該植物GSH含量和對重金屬的抗性。本論文以埃塞俄比亞芥為遺傳轉(zhuǎn)化材料,將菥蓂屬Thlaspi goesingense的絲氨酸乙酸轉(zhuǎn)移酶(Serine Acetyltransferase,SAT)基因通過農(nóng)桿菌介導的遺傳轉(zhuǎn)化方法轉(zhuǎn)入埃塞俄比亞芥子葉中,誘導愈傷出新的幼芽后經(jīng)卡那霉素初步篩選,淘汰紫化和白化苗,綠色健康的轉(zhuǎn)化苗進行生根培養(yǎng)后移入盆中。用SDS法對其進行DNA抽提,利用NptⅡ引物進行PCR鑒定后,篩選出的苗于開花前進行套袋,收取種子。第二年種下T1代種子,待長出真葉后進行NptⅡ鑒定,標記出相應(yīng)編號,花期套袋,單株收取種子,為T2代種子。對T2代幼苗進行NptⅡPCR鑒定鑒定,確定 4-8、8-19、4-5、8-16、1-23、3-9、1-27、7-15 等編號 T2 代轉(zhuǎn)基因頻率均超過 50%,最高為67%。用硫酸鎳處理埃塞俄比亞芥種子,觀察幼苗生長情況,結(jié)果表明:各轉(zhuǎn)基因品系種子萌發(fā)率率與野生型差異均不顯著;3-9、6-10的相對存活率顯著高于野生型;4-5、6-10、1-23、8-18相對根長顯著高于野生型,其余品系與野生型差異不顯著;6-10、6-17相對苗長顯著高于野生型,其他品系與野生型差異不顯著;7-15、4-8、6-10、7-11、4-5、6-17、1-27、3-9、1-23、8-18、8-16的相對鮮重顯著高于野生型,其余品系與野生型差異不顯著。6-10在存活率、根長、苗長、鮮重四個方面,均表現(xiàn)除對鎳良好的耐性。對T2代73棵埃塞俄比亞芥幼苗進行PCR鑒定,發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因苗總數(shù)為36棵,其葉綠素A平均值為0.725,平均葉綠素B為0.355,葉綠素A和葉綠素B之比為2.063;非轉(zhuǎn)基因苗總共37棵,其葉綠素A平均值為0.685,平均葉綠素B為0.363,葉綠素A和葉綠素B之比為1.920。轉(zhuǎn)基因苗葉綠素A較非轉(zhuǎn)基因苗高5.84%,葉綠素B較非轉(zhuǎn)基因苗低2.20%,葉綠素A/B較非轉(zhuǎn)基因苗高7.45%。這一結(jié)果初步表明轉(zhuǎn)SAT基因?qū)ΠＨ肀葋喗娴哪玩囆杂幸欢ㄌ岣摺?br> 【學位授予單位】：湖北大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：Q943.2
【圖文】：

埃塞俄比亞芥,生芽,角果,花序

圖１．１埃塞俄比亞芥頂生芽、花序、角果、種子??埃塞俄比亞芥雖然和油菜等同為蕓薹屬植物，但是埃塞俄比亞芥本身無需春化干旱。埃塞俄比亞芥莖稈為非直立莖，莖稈粗壯，側(cè)枝很多，腋生花絮長勢旺盛，花而上盛，塞比亞，，呈色，

過程圖,農(nóng)桿菌,多因素影響,轉(zhuǎn)化過程

合到植物基因組上。農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化宿主細胞的過程中，誘導農(nóng)桿菌激活的趨化蛋白和??Ｔ－ＤＮＡ進入細胞后相關(guān)蛋白的協(xié)同作用是轉(zhuǎn)化成功與否的重要因素。農(nóng)桿菌Ｔ－ＤＮＡ轉(zhuǎn)??化植物細胞過程見圖１．２。??１１??

預(yù)培養(yǎng),埃塞俄比亞芥,遺傳轉(zhuǎn)化,種子萌發(fā)