發(fā)布時間：2020-11-21 17:41

　　 目的：通過對H22荷瘤小鼠移植瘤基因表達(dá)譜的檢測,發(fā)現(xiàn)更多與消癌解毒方治療作用相關(guān)的信號通路和細(xì)胞因子。通過細(xì)胞實(shí)驗,從細(xì)胞分了水平進(jìn)一步探討消癌解毒方抗癌機(jī)制。 方法：動物實(shí)驗部分,H22荷瘤小鼠隨機(jī)分為空白對照組,消癌解毒方低、中、高劑量組和順鉑組。應(yīng)用基因芯片技術(shù),檢測各組H22荷瘤小鼠腫瘤組織的差異表達(dá)基因；應(yīng)用Gene Ontology (GO)和pathway分析,找出與消癌解毒方抗癌機(jī)制相關(guān)的信號通路和基因；并用實(shí)時定量PCR法(Realtime-PCR)驗證MMP9、MMP12、TIMP2、VEGF和TGFβ等基因的表達(dá)。細(xì)胞實(shí)驗部分,以低、中、高劑量組的消癌解毒方含藥血清培養(yǎng)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞,噻唑藍(lán)還原法(MTT)檢測消癌解毒方對肝癌細(xì)胞的抑制作用；電鏡觀察細(xì)胞的凋亡形態(tài)；膜聯(lián)蛋白A5一綠色熒光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的凋亡率；Western Blot法檢測細(xì)胞TLR2、TRAF6、TGFβ、VEGF、MMP2、 Survivin和Livin蛋白的表達(dá)。 結(jié)果：消癌解毒方能改變H22荷瘤小鼠移植瘤多個基因的表達(dá),并能顯著影響多個與腫瘤生長、凋亡和免疫相關(guān)的信號通路；下調(diào)H22荷瘤小鼠MMP9、MMP12、VEGF和TGFβ,上調(diào)TIMP2和IRF1基因的表達(dá)。消癌解毒方含藥血清能明顯抑制人肝癌SMMC-7721細(xì)胞在體外的增殖,抑制率以24h時效果最佳,分別為低劑量組(4.2%)、中劑量組(12.1%)、高劑量組(35.8%)、順鉑組(35.3%),消癌解毒方高劑量組與順鉑組無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)；消癌解毒方能明顯促進(jìn)肝癌細(xì)胞的凋亡,電鏡下SMMC-7721細(xì)胞出現(xiàn)明顯的細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變；Annexin V-FITC/PI流式細(xì)胞儀檢測消癌解毒方含藥血清作用人肝癌SMMC-7721細(xì)胞24h后的凋亡率,高劑量組(23.04±1.6%)與順鉑組(22.84±4.4%)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；Western Blot法檢測發(fā)現(xiàn),消癌解毒方各劑量組TLR2、TRAF6、TGFβ、 VEGF、MMP2、Survivin和Livin蛋白的表達(dá)明顯低于空白對照組。 結(jié)論：消癌解毒方能抑制H22荷瘤小鼠移植瘤的生長,影響多個與腫瘤增殖、凋亡和免疫相關(guān)的基因和信號通路；下調(diào)H22荷瘤小鼠MMP9、MMP12、VEGF和TGFβ基因,上調(diào)TIMP2和IRF1基因的表達(dá)。消癌解毒方含藥血清能抑制人肝癌SMMC-7721細(xì)胞的增殖,促進(jìn)其凋亡；下調(diào)TLR2、TRAF6、TGFβ、VEGF、MMP2、Survivin和Livin蛋白的表達(dá)。這些可能是消癌解毒方發(fā)揮抗癌作用的機(jī)制。
【學(xué)位單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2013
【中圖分類】：R273
【文章目錄】：
目錄
摘要
ABSTRACT
英文縮略詞
前言
    參考文獻(xiàn)
第一章 理論研究
    第一節(jié) 癌毒理論及其治療方法的探討
        1 癌毒理論
        2 癌毒的治療方法
        參考文獻(xiàn)
    第二節(jié) 基因芯片技術(shù)在中醫(yī)藥研究中的應(yīng)用
        1 基因芯片技術(shù)在中藥基因組學(xué)中的應(yīng)用
        2 基因芯片技術(shù)在中醫(yī)基因組學(xué)中的應(yīng)用
        參考文獻(xiàn)
    第三節(jié) 中藥抗腫瘤的研究進(jìn)展
        1 抑制腫瘤細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和分化
        2 抑制腫瘤血管生成
        3 抑制細(xì)胞外基質(zhì)的降解
        4 調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能
        5 抗多藥耐藥作用
        6 對化療的增效減毒作用
        7 對信息傳導(dǎo)途徑的作用
        8 對腫瘤細(xì)胞端粒酶的影響
        參考文獻(xiàn)
第二章 實(shí)驗研究
    第一節(jié) 消癌解毒方對H22荷瘤小鼠移植瘤的抑制和促凋亡實(shí)驗研究基礎(chǔ)
    第二節(jié) 消癌解毒方對H22荷瘤小鼠移植瘤基因表達(dá)譜的影響
        1 實(shí)驗材料
        2 實(shí)驗方法
        3 實(shí)驗結(jié)果
        4 討論
        參考文獻(xiàn)
    第三節(jié) Realtime-PCR法檢測消癌解毒方作用后H22荷瘤小鼠移植瘤的差異表達(dá)基因
        1 實(shí)驗材料
        2 實(shí)驗方法
        3 實(shí)驗結(jié)果
        4 討論
        參考文獻(xiàn)
    第四節(jié) 消癌解毒方含藥血清對人肝癌SMMC-7721細(xì)胞的影響
        1 實(shí)驗材料
        2 實(shí)驗方法
        3 實(shí)驗結(jié)果
        4 討論
        參考文獻(xiàn)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀博士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
作者簡介

【參考文獻(xiàn)】

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10 羅民;盛輝;王醫(yī)林;;紅景天對肝癌細(xì)胞增殖的抑制作用[J];吉林醫(yī)學(xué);2005年12期

本文編號：2893370