發(fā)布時間：2024-06-01 17:16

　　論文主要研究了兩個方面的內(nèi)容。一是對人白細胞介素2基因序列進行了改造和優(yōu)化。首先將人白細胞介素2基因編碼序列(CDS)改造成大腸桿菌的高表達模式,選用了大腸桿菌高表達基因的核糖體結(jié)合位點(Shine-Dalgarno sequence,簡稱SD)序列,作為對比還選用了大腸桿菌低表達基因的SD序列。然后組裝成“高表達SD+改造后CDS”和“高表達SD+改造前CDS”基因?qū)φ战M;“高表達SD+改造后CDS”和“低表達SD+改造后CDS”基因?qū)φ战M。前者主要考察改造CDS對基因表達的影響,后者主要檢驗SD序列的優(yōu)化選擇對基因表達的影響。二是將組裝的兩組基因序列在大腸桿菌TOP10中克隆及表達,通過實驗來驗證改造和優(yōu)化后人白細胞介素2基因(hIL-2)表達水平的理論預測。理論推測改造后的hIL-2基因編碼序列在大腸桿菌中的表達水平為CAI=0.884,原h(huán)IL-2基因編碼序列在大腸桿菌中的表達水平為CAI=0.267。為了保證編碼基因表達的正常啟動,選取大腸桿菌rplL高表達基因的啟動子區(qū)和終止子區(qū)來代替hIL-2基因的啟動子區(qū)和終止子區(qū)。其中高表達SD序列選用該基因的SD序列,低表達SD序列...

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2.1大腸桿菌高表達基因密碼子間第三位點堿基關(guān)聯(lián)強度分布

.1大腸桿菌高表達基因密碼子間第三位點堿基關(guān)聯(lián)強度分布。縱坐標表示堿基對的關(guān)聯(lián)強度，橫16種堿基對。2.1Basecorrelationintensitydistributionsofthethirdsitebetweentheadjacentcod....

圖2.2兩組mRNA實驗對照圖

內(nèi)蒙古大學碩士學位論文2.4完整mRNA序列的構(gòu)建2.3給出的編碼序列和表2.4給出的啟動子序列以及終止子序列，構(gòu)：“高表達SD+改造前CDS”，命名為WILmRNA；“高表達SD+RNA；“低表達SD+改造后CDS”，命名為LSDmRNA以及“高....

圖3.1重組克隆載體pGM-T/hIL-2的構(gòu)建圖

圖3.1重組克隆載體pGM-T/hIL-2的構(gòu)建圖Fig.3.1ConstructionofrecombinantcloningvectorpGM-T/hIL-2IL的PCR產(chǎn)物經(jīng)過電泳檢測，對長度正確的片段進行膠回收，據(jù)濃度的大小與適量克隆載體pGM....

圖3.2WIL的克隆轉(zhuǎn)化

圖3.2WIL的克隆轉(zhuǎn)化圖3.3GIL的克隆轉(zhuǎn)化Fig.3.2CloningtransformationofWILFig.3.3CloningtransformationofGIL.3.3陽性重組質(zhì)粒初步檢測挑取白色菌落直接進行PCR檢測，將....

本文編號：3986217