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改造人白細胞介素2基因序列并在大腸桿菌中做表達驗證

發(fā)布時間:2024-06-01 17:16
  論文主要研究了兩個方面的內(nèi)容。一是對人白細胞介素2基因序列進行了改造和優(yōu)化。首先將人白細胞介素2基因編碼序列(CDS)改造成大腸桿菌的高表達模式,選用了大腸桿菌高表達基因的核糖體結(jié)合位點(Shine-Dalgarno sequence,簡稱SD)序列,作為對比還選用了大腸桿菌低表達基因的SD序列。然后組裝成“高表達SD+改造后CDS”和“高表達SD+改造前CDS”基因?qū)φ战M;“高表達SD+改造后CDS”和“低表達SD+改造后CDS”基因?qū)φ战M。前者主要考察改造CDS對基因表達的影響,后者主要檢驗SD序列的優(yōu)化選擇對基因表達的影響。二是將組裝的兩組基因序列在大腸桿菌TOP10中克隆及表達,通過實驗來驗證改造和優(yōu)化后人白細胞介素2基因(hIL-2)表達水平的理論預測。理論推測改造后的hIL-2基因編碼序列在大腸桿菌中的表達水平為CAI=0.884,原h(huán)IL-2基因編碼序列在大腸桿菌中的表達水平為CAI=0.267。為了保證編碼基因表達的正常啟動,選取大腸桿菌rplL高表達基因的啟動子區(qū)和終止子區(qū)來代替hIL-2基因的啟動子區(qū)和終止子區(qū)。其中高表達SD序列選用該基因的SD序列,低表達SD序列...

【文章頁數(shù)】:63 頁

【學位級別】:碩士

【部分圖文】:

圖2.1大腸桿菌高表達基因密碼子間第三位點堿基關(guān)聯(lián)強度分布

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.1大腸桿菌高表達基因密碼子間第三位點堿基關(guān)聯(lián)強度分布。縱坐標表示堿基對的關(guān)聯(lián)強度,橫16種堿基對。2.1Basecorrelationintensitydistributionsofthethirdsitebetweentheadjacentcod....


圖2.2兩組mRNA實驗對照圖

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圖3.1重組克隆載體pGM-T/hIL-2的構(gòu)建圖

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圖3.2WIL的克隆轉(zhuǎn)化

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本文編號:3986217

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