發(fā)布時間：2025-01-05 23:03

　　促性腺激素釋放激素受體(Gn RHR)是G蛋白偶聯(lián)受體家族的成員,其特征是有一個七次跨膜螺旋結構,它在垂體促性腺激素細胞以及乳腺,卵巢和前列腺等的表面表達。促性腺激素釋放激素(Gn RH)與其結合后,該受體與第二信使G蛋白結合,受體的激活最終導致促性腺促黃體生成激素和促卵泡激素的釋放。此受體結構的研究可為突破該受體的結構解析瓶頸做鋪墊,了解其具體下游作用機制做鋪墊,以該受體為靶標的藥物開發(fā)提供一定的理論基礎,同時當此受體作為一種藥物靶標時,為前列腺癌、子宮內(nèi)膜異位癥、青春期早熟等相關疾病的治療提供新的思路與策略。本課題欲對Gn RHR進行表達純化與功能性研究。針對受體蛋白目的基因進行克隆設計和克隆優(yōu)化,選擇不同框架構建分子克隆,并對目的蛋白進行表達純化實驗檢測其蛋白表達情況。然后進行功能性研究實驗,針對基因質粒進行分子突變,欲構建成對配體響應性良好的蛋白受體質粒,通過報告基因實驗檢驗其活力。若檢驗受體蛋白性質良好,熱穩(wěn)定性高、活力性強、單一構象等,再進行蛋白表達純化實驗檢測其表達情況。課題針對目的基因設計了幾個框架,完成了p Fast Bac-HA-Bril-h Gn RHR-tev-O...

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 緒論
    1.1 G蛋白偶聯(lián)受體
        1.1.1 G蛋白偶聯(lián)受體概念
        1.1.2 G蛋白偶聯(lián)受體結構
        1.1.3 G蛋白偶聯(lián)受體功能
    1.2 促性腺激素釋放激素受體
        1.2.1 促性腺激素釋放激素受體背景介紹
        1.2.2 促性腺激素釋放激素受體遺傳變化與健康關系
        1.2.3 促性腺激素釋放激素受體作用機制
        1.2.4 促性腺激素釋放激素受體基因的表達調(diào)控
        1.2.5 促性腺激素釋放激素受體生物學意義
        1.2.6 促性腺激素釋放激素受體研究目的和意義
    1.3 國內(nèi)外在該方向的研究現(xiàn)狀及分析
        1.3.1 國外研究現(xiàn)狀
        1.3.2 國內(nèi)研究現(xiàn)狀
    1.4 本文的主要研究內(nèi)容
        1.4.1 產(chǎn)生高表達蛋白條件的摸索
        1.4.2 選擇性質良好的蛋白
第2章 實驗材料試劑與儀器
    2.1 實驗材料
    2.2 實驗試劑
    2.3 實驗儀器
第3章 基于促性腺激素釋放激素受體分子克隆的研究
    3.1 引言
    3.2 基于促性腺激素釋放激素受體的分子克隆
        3.2.1 pFastBac-HA-Bril-hGnRHR-tev-OMBP-MBP-H8質粒的構建
        3.2.2 pcDNA3-HA-Flag-H10-tev-Bril-hGnRHR質粒的構建
        3.2.3 pFastBac-HA-hGnRHR-tev-OMBP-MBP質粒的構建
    3.3 本章小結
第4章 促性腺激素釋放激素受體野生型蛋白表達純化
    4.1 引言
    4.2 三種框架下促性腺激素釋放激素受體蛋白表達純化
        4.2.1 pFastBac-HA-Bril-hGnRHR-tev-OMBP-MBP-H8質粒蛋白表達純化
        4.2.2 pcDNA3-HA-Flag-H10-tev-Bril-hGnRHR質粒蛋白表達純化
        4.2.3 GnRHR-2MBPGαq/Gβ/Gγ復合物蛋白表達純化
    4.3 本章小結
第5章 促性腺激素釋放激素受體突變體雙熒光素酶報告基因檢測
    5.1 引言
    5.2 促性腺激素釋放激素受體雙熒光素酶報告基因檢測
        5.2.1 促性腺激素釋放激素受體在SRE、CRE、NFAT通路報告基因檢測
        5.2.2 促性腺激素釋放激素受體七組突變體報告基因檢測
        5.2.3 促性腺激素釋放激素受體三組突變體報告基因檢測
        5.2.4 促性腺激素釋放激素受體一組突變體報告基因檢測
        5.2.5 促性腺激素釋放激素受體兩組突變體報告基因檢測
        5.2.6 促性腺激素釋放激素受體四組突變體報告基因檢測
        5.2.7 促性腺激素釋放激素受體新一組突變體報告基因檢測
    5.3 本章小結
第6章 促性腺激素釋放激素受體突變體蛋白表達純化
    6.1 引言
    6.2 突變下促性腺激素釋放激素受體蛋白表達純化
    6.3 本章小結
結論
參考文獻
致謝



本文編號：4023408