發(fā)布時間：2025-01-06 06:37

　　酯酶可催化酯類的水解、合成和酯交換,在真核生物和原核生物中廣泛存在。食品、化妝品和醫(yī)藥等工業(yè)用酯酶大多為細菌來源,其中細菌HSL家族酯酶因底物譜較廣且具有嚴苛條件的適應性等特點,已被應用于食品香料制備和食品安全檢測。不同細菌來源HSL家族酯酶的催化特性差異較大,開展蛋白結(jié)構(gòu)研究對解釋其結(jié)構(gòu)與催化特性之間的關(guān)系和指導酶工程改造至關(guān)重要。本研究從具有烷烴降解能力的赤桿菌基因組中篩選新型HSL家族酯酶,通過酶學表征和晶體結(jié)構(gòu)研究,為細菌HSL家族酯酶的催化機制和功能研究提供數(shù)據(jù)支持。從13株赤桿菌科細菌基因組中利用序列比對篩選出12個HSL家族酯酶。經(jīng)氨基酸序列分析以及通過基因克隆、異源表達和純化,確定了兩個可溶性表達量大、性質(zhì)穩(wěn)定酯酶Poc14和Pot7作為研究對象。其中,酯酶Poc14的分子量為35.7 kDa,酯酶Pot7的分子量大小為33.7 kDa。酶學性質(zhì)表征結(jié)果顯示酯酶Poc14和Pot7的最適底物都為對硝基苯酚己酸酯,最適反應條件:溫度為55?C,pH為6.0–9.0。酯酶Poc14和Pot7具有較強的熱穩(wěn)定性,對NaCl、多種金屬離子和有機溶劑具有很強的耐受性,并且相比Pot...

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.2基因組注釋流程

圖1.2基因組注釋流程[58]Figure1.2TheprocessofgenomeannotationL家族酯酶的研究現(xiàn)狀L家族酯酶通常優(yōu)先水解短鏈的對硝基苯酯（p-nitrophenylesteributyrin）。第一個被發(fā)現(xiàn)和歸類為細菌來源的HSL....

圖1.3鄰苯二甲酸二乙酯和鄰苯二甲酸二辛酯的化學結(jié)構(gòu)

一類持久性污染物[85]。在自然條件下的水解和光解的降物降解鄰苯二甲酸酯被認為是主要途徑，首先都是通過酯[88,89]，然后水解為鄰苯二甲酸進入后續(xù)的降解途徑二甲酸酯的目標菌株，但能夠大多數(shù)菌株都不能利用鄰度高會抑制菌體生長，重要的是能夠水解長鏈的如結(jié)構(gòu)此，利用分子生物學技術(shù)從....

圖1.4細菌HSL家族酯酶與人源HSL家族脂肪酶的結(jié)構(gòu)域比較

其含有兩個結(jié)構(gòu)域，分別是N端的可能與脂肪細胞的脂質(zhì)結(jié)合蛋白具有相互作結(jié)合結(jié)構(gòu)域以及C端的含有Ser-Asp-His催化三聯(lián)體的催化結(jié)構(gòu)域；而細菌來L家族酯酶N端含有一個CAP結(jié)構(gòu)域，C端含有催化結(jié)構(gòu)域[97,98]，幾個具有代菌來源的HSL家族酯酶與人源....

圖2.2HSL家族酯酶的多序列比對分析

注：黑色框表示的是HSL家族的保守基序；藍色實心點突出的是參與氧陰離子洞的氨基酸基；紅色實心點表示的是催化三聯(lián)體的氨基酸殘基殘基）圖2.2HSL家族酯酶的多序列比對分析Figure2.2Multiplesequencealignmentanalysisof....

本文編號：4023944