發(fā)布時(shí)間：2025-03-30 02:40

　　固定化酶是用物理或化學(xué)手段,使之成為不溶于水的,具有酶活性,可在一定的空間范圍內(nèi)起催化作用,并能反復(fù)和連續(xù)使用的酶。目前在酶的應(yīng)用領(lǐng)域,固定化技術(shù)已經(jīng)成為一個(gè)重要的研究項(xiàng)目。與游離酶相比,固定化酶具有高穩(wěn)定性、回收方便、反應(yīng)可控、成本低、可循環(huán)利用等優(yōu)點(diǎn)。在臨床診斷、化學(xué)分析、環(huán)境保護(hù)和能源開發(fā)等領(lǐng)域,固定化酶均表現(xiàn)出不可替代的作用。D-氨基酸作為重要的中間體,常用于合成抗生素、活性肽、農(nóng)藥、食品添加劑等。目前D-氨基酸的生產(chǎn)主要采用化學(xué)法,但是具有反應(yīng)條件非常劇烈、污染較大和費(fèi)用高等多個(gè)缺點(diǎn),而生物法生產(chǎn)D-氨基酸具有反應(yīng)條件溫和,污染小等優(yōu)點(diǎn)。其中利用D-氨基�；�酶特異性水解N-�；�-D-氨基酸制備D-氨基酸的方法理論生產(chǎn)率為100%,具有較大的應(yīng)用潛力。本研究針對(duì)來源于M.natoriense TNJL143-2的D-氨基�；�酶,首次嘗試?yán)�用瓊脂糖、介孔二氧化硅MCM-41、SBA-15三種載體,通過包埋法以及吸附法對(duì)其進(jìn)行固定化,并分別對(duì)所制備的各固定化酶的適用范圍、穩(wěn)定性、重復(fù)利用性以及固定化效果等數(shù)據(jù)進(jìn)行檢測(cè)分析,以對(duì)比各固定化酶間的性能差異。結(jié)果顯示制備的三種固定化酶均表現(xiàn)...

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 前序
        1.1.1 D-氨基酸的概念
        1.1.2 D-氨基酸的分布
        1.1.3 D-氨基酸的用途
        1.1.4 D-氨基酸的生產(chǎn)途徑
    1.2 研究背景
        1.2.1 D-氨基�；�酶
        1.2.2 固定化酶的研究進(jìn)展與現(xiàn)狀
    1.3 研究材料
        1.3.1 來源于Microbacterium natoriense的 D-氨基酰化酶
        1.3.2 本研究中固定化酶載體的選擇
    1.4 研究?jī)?nèi)容
    1.5 研究目的及意義
第二章 酶的固定化
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 培養(yǎng)基及溶液
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)菌株
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 Microbacterium natoriense TNJL143-2 菌株的恢復(fù)培養(yǎng)及保存
        2.2.2 粗酶液的制備
        2.2.3 薄層層析法(TLC)鑒定粗酶液D-氨基酰化酶活性
        2.2.4 酶的固定化方法
        2.2.5 薄層層析法(TLC)鑒定固定化酶活性
        2.2.6 考馬斯亮藍(lán)法檢測(cè)蛋白質(zhì)的固定量
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 D-氨基�；�酶活性鑒定結(jié)果
        2.3.2 固定化酶活性鑒定結(jié)果
        2.3.3 固定化酶的蛋白固定率
    2.4 本章小結(jié)
第三章 固定化酶的酶學(xué)性質(zhì)研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.3 溶液
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 D-氨基酸的定量檢測(cè)—DAO法
        3.2.2 固定化酶米氏常數(shù)(Km)的測(cè)定
        3.2.3 不同酶促反應(yīng)條件對(duì)固定化酶活性的影響
        3.2.4 保存穩(wěn)定性
        3.2.5 抗生素及廣譜型酶穩(wěn)定劑對(duì)固定化酶保存穩(wěn)定性的影響
        3.2.6 重復(fù)利用性
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 固定化酶米氏常數(shù)(Km)測(cè)定
        3.3.2 最適pH
        3.3.3 最適溫度
        3.3.4 酸堿穩(wěn)定性
        3.3.5 熱穩(wěn)定性
        3.3.6 保存穩(wěn)定性
        3.3.7 抗生素及廣譜型酶穩(wěn)定劑對(duì)固定化酶保存穩(wěn)定性的影響
        3.3.8 重復(fù)利用性
    3.4 本章小結(jié)
第四章 固定化酶蛋白固定效果的研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.3 溶液
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 不同pH反應(yīng)條件對(duì)蛋白固定化效果的影響
        4.2.2 不同pH保存條件對(duì)蛋白固定化效果的影響
        4.2.3 不同溫度反應(yīng)條件對(duì)蛋白固定化效果的影響
        4.2.4 不同溫度保存條件對(duì)蛋白固定化效果的影響
        4.2.5 保存時(shí)間對(duì)蛋白固定化效果的影響
        4.2.6 反應(yīng)次數(shù)對(duì)蛋白固定化效果的影響
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 不同pH反應(yīng)條件對(duì)蛋白固定化效果的影響
        4.3.2 不同pH保存條件對(duì)蛋白固定化效果的影響
        4.3.3 不同溫度反應(yīng)條件對(duì)蛋白固定化效果的影響
        4.3.4 不同溫度保存條件對(duì)蛋白固定化效果的影響
        4.3.5 保存時(shí)間對(duì)蛋白固定化效果的影響
        4.3.6 反應(yīng)次數(shù)對(duì)蛋白固定化效果的影響
    4.4 本章小結(jié)
第五章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間取得的成果
致謝



本文編號(hào)：4038057