發(fā)布時間：2025-04-15 05:05

　　 毛細(xì)管電泳技術(shù)具有操作簡單、樣品消耗量少、分離效率高和分析速度快等優(yōu)勢,不僅是一種高效的分離分析技術(shù),而且已經(jīng)發(fā)展成為在線酶分析和酶抑制研究的強(qiáng)有力工具。酶反應(yīng)全程的實(shí)時在線監(jiān)測,可以實(shí)現(xiàn)酶反應(yīng)動力學(xué)過程的高時間分辨精確檢測,以更準(zhǔn)確地獲得反應(yīng)機(jī)制和反應(yīng)速率常數(shù),有助于更好地了解酶反應(yīng)機(jī)制,從而更全面深入地認(rèn)識酶在生物代謝中的功能。此外,準(zhǔn)確、快速的在線酶抑制劑高通量篩選方法的發(fā)展,對加快酶抑制類藥物的研發(fā)以及疾病的臨床診斷亦具有重要意義。電泳媒介微分析法(EMMA)和固定化酶微反應(yīng)器(IMER)是毛細(xì)管電泳酶分析技術(shù)中常用的在線分析方法。這兩種在線酶分析法的進(jìn)樣方式通常為流體動力學(xué)進(jìn)樣和電動進(jìn)樣,無法實(shí)現(xiàn)酶反應(yīng)過程中的無干擾序列進(jìn)樣分析。近年來,基于快速序列進(jìn)樣的毛細(xì)管電泳序列分析技術(shù)已經(jīng)發(fā)展成為在線酶分析的另一種強(qiáng)有力手段,以實(shí)現(xiàn)高時間分辨和高通量的酶分析在線檢測。該文從快速序列進(jìn)樣的角度,綜述了近年來毛細(xì)管電泳序列分析技術(shù)在線酶分析的研究進(jìn)展,并著重介紹了各種序列進(jìn)樣方法及其在酶反應(yīng)和酶抑制反應(yīng)中的應(yīng)用,包括光快門進(jìn)樣、流動門進(jìn)樣、毛細(xì)管對接的二維擴(kuò)散進(jìn)樣、流動注射進(jìn)樣、液滴微流...

【文章頁數(shù)】：11 頁

【部分圖文】：

圖 2 (a)OGPB-UV-Vis毛細(xì)管電泳序列分析裝置圖,(b)Asn和 Asp標(biāo)準(zhǔn)混合溶液20次連續(xù)進(jìn)樣電泳譜圖和(c)L-天冬酰胺酶催化酶反應(yīng)中底物、產(chǎn)物峰隨酶催化時間的變化圖[12]

圖1(a)OGPB-LIF毛細(xì)管電泳序列分析裝置、(b)毛細(xì)管進(jìn)樣端示意圖和(c)固定化胰蛋白酶酶催化反應(yīng)中底物、產(chǎn)物峰隨酶催化反應(yīng)時間的變化圖[11]為了克服上述問題,Chen等[11]提出了一種基于光快門進(jìn)樣技術(shù)和自制的固定化酶隔離裝置聯(lián)用的在線酶分析系統(tǒng)(見圖1a和圖....

圖 1 (a)OGPB-LIF毛細(xì)管電泳序列分析裝置、(b)毛細(xì)管 進(jìn)樣端示意圖和(c)固定化胰蛋白酶酶催化反應(yīng)中底物、產(chǎn)物峰隨酶催化反應(yīng)時間的變化圖[11]

Xu等[9]首次將光快門進(jìn)樣技術(shù)與微芯片電泳法結(jié)合,應(yīng)用于在線酶分析,研究測定了β-半乳糖苷酶的酶活性和競爭性酶抑制反應(yīng)。在分析過程中,底物和酶先在離心管中混合,然后轉(zhuǎn)移到芯片上的儲液槽中。在反應(yīng)過程中,將樣品連續(xù)引入微芯片的分離通道中,通過光快門實(shí)現(xiàn)序列進(jìn)樣,進(jìn)而實(shí)現(xiàn)底物和產(chǎn)物....

圖 3 (a)流動門進(jìn)樣與芯片毛細(xì)管電泳聯(lián)用用于在線酶分析 示意圖和(b)谷胱甘肽還原酶催化酶反應(yīng)中產(chǎn)物GSH*隨酶催化反應(yīng)時間的變化圖[15]

1993年,Lemmo和Jorgenson研究組[28]提出了流動門進(jìn)樣技術(shù)。該進(jìn)樣方法是將兩根相距一小段間隙的毛細(xì)管同軸對齊,其中一根毛細(xì)管為引樣毛細(xì)管,另一根為分離毛細(xì)管,在兩根對接毛細(xì)管的垂直方向上連接一個流動泵,流動泵打開時,緩沖溶液被不斷引入兩根毛細(xì)管間隙,流動的緩沖溶....

圖 4 (a)二維擴(kuò)散進(jìn)樣毛細(xì)管電泳在線連續(xù)分析裝置圖和 (b)Ala和Glu標(biāo)準(zhǔn)混合溶液20次連續(xù)進(jìn)樣的電泳譜圖[16]

Chen等[16]在2012年提出了一種基于擴(kuò)散進(jìn)樣實(shí)現(xiàn)CE序列分析的方法(見圖4a)。該裝置是將兩根一端磨平的毛細(xì)管同軸固定于一個樣品池中,毛細(xì)管間隔距離在1.5μm左右。CE分析時,通過周期性地控制高壓電源的開(樣品分離)、關(guān)(擴(kuò)散進(jìn)樣),實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確的在線序列進(jìn)樣和連續(xù)CE分....

本文編號：4040121