發(fā)布時(shí)間：2025-06-04 02:16

　　細(xì)胞組裝通常是按照預(yù)先設(shè)計(jì)的方式改造細(xì)胞,并實(shí)現(xiàn)特定的細(xì)胞間連接,從而賦予組裝的細(xì)胞群體特殊的功能。構(gòu)建細(xì)胞組裝模型不僅對(duì)研究細(xì)胞間通訊、組織和器官形成、免疫反應(yīng)和癌癥轉(zhuǎn)移至關(guān)重要,還可以重構(gòu)體外疾病模型并研究各種治療方法的有效性。然而,傳統(tǒng)單價(jià)修飾方式細(xì)胞組裝效率較低,這大大制約了細(xì)胞組裝技術(shù)的廣泛應(yīng)用。傳統(tǒng)的單價(jià)修飾在每個(gè)修飾位點(diǎn)只提供一個(gè)結(jié)合位點(diǎn),而多價(jià)修飾的優(yōu)勢(shì)在于每個(gè)修飾位點(diǎn)可擴(kuò)展出多個(gè)結(jié)合位點(diǎn)。本論文立足于如何實(shí)現(xiàn)高效細(xì)胞組裝這個(gè)科學(xué)問題,利用DNA分子精確的堿基互補(bǔ)配對(duì)原則和可編程性,通過滾環(huán)復(fù)制技術(shù)合成的具有重復(fù)序列結(jié)構(gòu)的長(zhǎng)鏈DNA,實(shí)現(xiàn)細(xì)胞表面的多價(jià)修飾,提高細(xì)胞組裝效率。本論文引入了兩種多價(jià)修飾的方式用于提高細(xì)胞組裝效率。由以下兩部分構(gòu)成:第一部分:滾環(huán)復(fù)制技術(shù)用于細(xì)胞組裝及其在再馴化巨噬細(xì)胞中的應(yīng)用。通過滾環(huán)復(fù)制技術(shù)制備具有重復(fù)序列的長(zhǎng)單鏈DNA,對(duì)細(xì)胞膜進(jìn)行修飾,開發(fā)了一種通用高效的細(xì)胞組裝方式。細(xì)胞膜通過溫和還原得到游離的巰基,利用巰基與馬來酰亞胺間的邁克爾加成反應(yīng),將端位馬來酰亞胺修飾的由滾環(huán)復(fù)制放大技術(shù)得到的長(zhǎng)鏈DNA修飾到細(xì)胞膜表面,并利用堿基互補(bǔ)作用實(shí)現(xiàn)...

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-4一些通過胺和巰基靶向化學(xué)的直接細(xì)胞表面修飾方法[12]

第一種為基于共價(jià)連接作用的細(xì)胞膜修飾方式。此方式將外來功能分子通過共價(jià)連接作用修飾到細(xì)胞膜上,常用的修飾位點(diǎn)是細(xì)胞表面蛋白的氨基和巰基[17,18](如圖1-4所示)。細(xì)胞表面的氨基可與N-羥基琥珀酰亞胺酯、氰尿酰氯活化的分子[19]或不飽和酯醛部分反應(yīng)[20]。激活的巰基可與馬....

圖1-5用于將非天然官能團(tuán)引入細(xì)胞表面聚糖中以進(jìn)行后續(xù)生物正交反應(yīng)的代謝方式[12]

此外,“Click”反應(yīng)基團(tuán)可以通過糖代謝途徑引入細(xì)胞表面(如圖1-5所示)。通過非天然唾液酸[27-29]的生物合成將多種非經(jīng)典化學(xué)功能基團(tuán)(例如酮和疊氮)[30-32]引入細(xì)胞表面。自Bertozzi等[33]首次開發(fā)該技術(shù)以來,該方法已廣泛用于靶向哺乳動(dòng)物細(xì)胞膜上的含糖物質(zhì)....

圖1-6細(xì)胞膜修飾法的應(yīng)用[50]

細(xì)胞膜修飾法的應(yīng)用非常廣泛,主要包括細(xì)胞熒光成像、藥物靶向遞送、促進(jìn)材料附著、細(xì)胞組裝、細(xì)胞外環(huán)境監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域。在此重點(diǎn)介紹以下四種應(yīng)用(圖1-6)。1.3.1細(xì)胞膜熒光成像

圖1-7細(xì)胞膜表面蛋白糖基化可視化示意圖[54]

膜蛋白在維持和調(diào)節(jié)細(xì)胞各項(xiàng)生理功能中均起著至關(guān)重要的作用,尤其是在受體識(shí)別和信號(hào)傳導(dǎo)方面。特定蛋白質(zhì)糖基化狀態(tài)的可視化研究對(duì)于揭示其在疾病發(fā)展中的作用非常重要。WeihongTan課題組[53]報(bào)道了一種細(xì)胞膜蛋白熒光成像新方式,結(jié)合核酸適體特異性識(shí)別,實(shí)現(xiàn)活細(xì)胞膜表面受體由無生....

本文編號(hào)：4049166