發(fā)布時間：2025-06-10 05:06

　　苜蓿是多年生牧草,因其草質(zhì)質(zhì)量好,產(chǎn)量和營養(yǎng)價值高,雞羊等各類畜禽均喜食,因此可作為重要的飼料作物。GH11家族木聚糖酶是一類能夠水解木聚糖主鏈β-1,4-D-木糖苷鍵的糖苷水解酶類,其溫度適應(yīng)范圍較廣,耐熱性較好,在苜蓿飼料工業(yè)生產(chǎn)中具有重要的研究價值。目前,國內(nèi)外對木聚糖酶的研究主要在產(chǎn)木聚糖酶菌種的篩選和馴化、木聚糖酶的分子結(jié)構(gòu)和功能改造、木聚糖酶的理化性質(zhì)等方面,而利用酵母雙雜交技術(shù)進行木聚糖酶相互作用蛋白的篩選方面的研究幾乎沒有報道。本研究旨在通過酵母雙雜交技術(shù)篩選出與木聚糖酶的互作蛋白,從而為研究木聚糖酶對木聚糖的降解機制,木聚糖酶合成機制以及耐熱木聚糖酶的生產(chǎn)奠定了理論基礎(chǔ)。研究結(jié)果如下:1.嗜熱真菌F1208酵母雙雜交cDNA文庫的構(gòu)建利用SMART方法構(gòu)建酵母雙雜交cDNA文庫,并檢測cDNA文庫的容量為1.50×10～6,滴定度是4.20×10～7 cfu/ml,且片段大小在200-2000 bp之間,說明該cDNA文庫合格,可用于后續(xù)實驗。2.酵母雙雜交篩選木聚糖酶互作蛋白根據(jù)目的基因序列設(shè)計克隆引物擴增T-Xyn基因,并構(gòu)建重組載體pGBKT7-T-Xyn,并檢測...

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 木聚糖
    1.2 木聚糖酶
        1.2.1 木聚糖酶定義
        1.2.2 木聚糖酶分類
        1.2.3 木聚糖酶的應(yīng)用
    1.3 耐熱木聚糖酶的研究
    1.4 耐熱木聚糖酶在飼料中的研究
    1.5 蛋白互作的研究方法
        1.5.1 酵母雙雜交技術(shù)
        1.5.2 Pull-down技術(shù)
        1.5.3 其他驗證蛋白互作的技術(shù)
    1.6 本研究的目的和意義
    1.7 技術(shù)路線
第2章 嗜熱真菌F1208酵母雙雜交cDNA文庫的構(gòu)建
    2.1 引言
    2.2 實驗材料和方法
        2.2.1 實驗材料
        2.2.2 實驗方法
    2.3 實驗結(jié)果與分析
        2.3.1 嗜熱真菌F1208總RNA的提取與檢測
        2.3.2 dscDNA的合成與純化
        2.3.3 嗜熱真菌F1208cDNA文庫的檢測
    2.4 本章小結(jié)
第3章 酵母雙雜交篩選木聚糖酶互作蛋白
    3.1 引言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 實驗材料
        3.2.2 實驗儀器與藥品
    3.3 實驗方法
        3.3.1 木聚糖酶T-Xyn基因的克隆
        3.3.2 pGBKT7-T-Xyn誘餌載體的構(gòu)建
        3.3.3 誘餌載體p GBKT7-T-Xyn的自激活及毒性檢測
        3.3.4 酵母雙雜交系統(tǒng)誘餌對cDNA文庫的篩選
    3.4 實驗結(jié)果與分析
        3.4.1 T-Xyn基因的克隆
        3.4.2 pGBKT7-T-Xyn誘餌載體的構(gòu)建
        3.4.3 誘餌載體的自激活及毒性檢測
        3.4.4 酵母雙雜交系統(tǒng)誘餌對cDNA文庫的篩選
    3.5 本章小結(jié)
第4章 木聚糖酶與候選蛋白的互作驗證
    4.1 引言
    4.2 實驗材料
        4.2.1 實驗材料
        4.2.2 實驗藥品及儀器
    4.3 實驗方法
        4.3.1 酵母雙雜交驗證互作蛋白
        4.3.2 Pull-down實驗驗證木聚糖酶與候選蛋白的互作
    4.4 實驗結(jié)果
        4.4.1 酵母雙雜交驗證互作蛋白
        4.4.2 Pull-down實驗驗證木聚糖酶與候選蛋白的互作
    4.5 本章小結(jié)
第5章 討論
    5.1 cDNA文庫的構(gòu)建
    5.2 酵母雙雜交系統(tǒng)
    5.3 酵母雙雜交篩選結(jié)果的分析
結(jié)論
參考文獻
攻讀碩士學(xué)位期間所發(fā)表的學(xué)位論文
致謝



本文編號：4050351