發(fā)布時(shí)間：2025-06-26 05:44

　　群體感應(yīng)（Quorum sensing,QS）是細(xì)菌通過(guò)特殊的化學(xué)信號(hào)分子進(jìn)行社交的一種方式。信號(hào)分子依賴于細(xì)胞密度,扮演著細(xì)胞間通訊的媒介作用來(lái)調(diào)控細(xì)胞生理代謝活動(dòng)。假交替單胞菌是一類新型的海洋細(xì)菌,其廣泛存在于海洋環(huán)境中,能產(chǎn)生多種活性物質(zhì)。越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)假交替單胞菌活性物質(zhì)的產(chǎn)生受QS的調(diào)控,但假交替單胞菌QS系統(tǒng)及其調(diào)控機(jī)制研究尚比較缺乏。實(shí)驗(yàn)室前期從西門島紅樹(shù)林海泥分離到一株具有QS能力的假交替單胞菌T1lg65,本論文旨在表征菌株T1lg65中Lux I/R型群體感應(yīng)特性,探究嚴(yán)謹(jǐn)饑餓蛋白A（Stringent Starvation Protein A,SspA）對(duì)其調(diào)控作用。通過(guò)基因組注釋發(fā)現(xiàn)菌株T1lg65存在一個(gè)信號(hào)分子合成酶基因lux I和信號(hào)分子受體蛋白基因lux R�；�因敲除和回補(bǔ)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):Δlux I和Δlux R喪失了產(chǎn)信號(hào)分子的能力,而Δlux I^c和Δlux R^c可以恢復(fù)到野生型表型,使信號(hào)分子指示菌A136顯藍(lán)色。隨之將lux I在E.coli BL21中重組表達(dá),重組大腸桿菌也能使指示菌A136變藍(lán)。對(duì)基...

【文章頁(yè)數(shù)】：77 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號(hào)說(shuō)明
第一章 緒論
    1.1 研究背景
    1.2 研究目的
    1.3 研究方案(技術(shù)路線)
    1.4 預(yù)期目標(biāo)
第二章 文獻(xiàn)綜述
    2.1 假交替單胞菌概述
        2.1.1 假交替單胞菌簡(jiǎn)介
        2.1.2 假交替單胞菌的生態(tài)學(xué)地位及生物功能
    2.2 群體感應(yīng)
        2.2.1 群體感應(yīng)概述
        2.2.2 群體感應(yīng)信號(hào)分子及其類型
        2.2.3 QS系統(tǒng)及其類型
        2.2.4 海洋細(xì)菌中的QS
    2.3 Sigma因子RpoS
    2.4 嚴(yán)謹(jǐn)饑餓蛋白A
        2.4.1 嚴(yán)謹(jǐn)饑餓蛋白A基本概況
        2.4.2 SspA研究進(jìn)展
第三章 研究?jī)?nèi)容與實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)藥品
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備
        3.1.3 菌種與質(zhì)粒
        3.1.4 引物
        3.1.5 培養(yǎng)基
        3.1.6 藥品溶液的配制
    3.2 基因敲除與回補(bǔ)
        3.2.1 基因組提取
        3.2.2 蔗糖敏感實(shí)驗(yàn)
        3.2.3 感受態(tài)的制備
        3.2.4 DNA純化
        3.2.5 質(zhì)粒提取
        3.2.6 轉(zhuǎn)化
        3.2.8 菌落PCR
        3.2.9 構(gòu)建敲除載體
        3.2.10 雙親接合
        3.2.11 第一輪重組子篩選
        3.2.12 第二輪重組子篩選
        3.2.13 基因回補(bǔ)
    3.3 異源表達(dá)信號(hào)分子合成酶
    3.4 信號(hào)分子的萃取與檢測(cè)
        3.4.1 信號(hào)分子的萃取
        3.4.2 平行劃線法(Cross-feeding)檢測(cè)AHLs
        3.4.3 報(bào)告平板法檢測(cè)AHLs
        3.4.4 薄層層析法(TLC)表征AHLs
    3.5 RNA的提取和熒光定量PCR
        3.5.1 RNA的提取
        3.5.2 熒光定量PCR
    3.6 啟動(dòng)子活性檢測(cè)
    3.7 表型檢測(cè)
        3.7.1 生長(zhǎng)曲線的測(cè)定
第四章 結(jié)果與討論
    4.1 菌株T1lg65中LuxI/R型 QS系統(tǒng)組成分析
        4.1.1 luxI的功能探究
        4.1.2 LuxI與 LuxR的互作關(guān)系
    4.2 群體感應(yīng)信號(hào)分子的鑒定
        4.2.1 生物法檢測(cè)信號(hào)分子產(chǎn)生情況
        4.2.2 薄層層析法(TLC)表征信號(hào)分子種類
    4.3 LuxI合成酶的保守性分析
    4.4 RpoS、H-NS和 SspA影響QS系統(tǒng)
    4.5 SspA對(duì) QS調(diào)控途徑的解析
第五章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 創(chuàng)新之處
    5.3 展望
附錄
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介
    1 作者簡(jiǎn)歷
    2 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
學(xué)位論文數(shù)據(jù)集



本文編號(hào)：4053254