發(fā)布時間：2020-11-16 14:57

　　 目的:觀察硫氫化鈉(sodium hydrosulfide,NaHS,外源性硫化氫供體)預(yù)處理大鼠腎小管上皮細胞(NRK-52SE)后,是否能減輕腎小管上皮細胞缺氧復(fù)氧損傷中氧化應(yīng)激的發(fā)生。方法:隨機將大鼠腎小管上皮細胞分為四組:空白對照組(Control組):細胞培養(yǎng)箱環(huán)境為37℃+95%空氣+5%二氧化碳+飽和濕度,放入細胞培養(yǎng)150分鐘,然后收集細胞。缺氧復(fù)氧組(HR組):細胞培養(yǎng)箱環(huán)境為37℃+95%氮氣+1%氧氣+4%二氧化碳+飽和濕度,放入細胞培養(yǎng)60分鐘后立即轉(zhuǎn)移至37℃+95%空氣+5%二氧化碳+飽和濕度環(huán)境的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)90分鐘,然后收集細胞。NaHS干預(yù)組(NaHS組):在濃度為100μmol/L的NaHS無血清培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)箱環(huán)境為37℃+95%氮氣+1%氧氣+4%二氧化碳+飽和濕度,放入細胞培養(yǎng)60分鐘后立即轉(zhuǎn)移至37℃+95%空氣+5%二氧化碳+飽和濕度環(huán)境的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)90分鐘,然后收集細胞。二苯基氯化碘鹽(diphenylene iodonium,DPI)干預(yù)組(DPI組):在濃度為1μmol/L的DPI無血清培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)箱環(huán)境為37℃+95%氮氣+1%氧氣+4%二氧化碳+飽和濕度,放入細胞培養(yǎng)60分鐘后立即轉(zhuǎn)移至37℃+95%空氣+5%二氧化碳+飽和濕度環(huán)境的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)90分鐘,然后收集細胞。蛋白免疫印跡法(Western blotting)檢測各組細胞煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶(NOX)2和NOX4的蛋白表達。實時熒光定量PCR法(RT-PCR法)檢測各組細胞中NOX2和NOX4的mRNA的表達。熒光探針2',7'-二氯熒光黃雙乙酸鹽(DCFH-DA)法檢測各組細胞中活性氧簇(ROS)的含量。酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)法檢測各組細胞中NADPH氧化酶的活性。結(jié)果:與Control組比較,HR組細胞的NOX2、NOX4的蛋白含量和mRNA含量表達顯著增加(均P0.05),ROS含量明顯增加(P0.01),NADPH氧化酶活性明顯增高(均P0.01)。與HR組比較,NaHS組和DPI組細胞的NOX2、NOX4的蛋白含量和mRNA含量表達均下降(均P0.05),ROS含量均減少(均P0.01),NADPH氧化酶活性均降低(均P0.01)。結(jié)論:硫化氫在大鼠腎小管上皮細胞缺氧復(fù)氧損傷過程中可以通過減少NOX2、NOX4的mRNA和蛋白的表達,降低ROS的含量,降低NADPH氧化酶的活性來減輕腎小管上皮細胞缺氧復(fù)氧損傷中氧化應(yīng)激的發(fā)生。
【學(xué)位單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2020
【中圖分類】：R692
【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
常用縮寫詞中英文對照表
前言
1 材料與方法
    1.1 實驗材料
    1.2 實驗方法
    1.3 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié)果
3 討論
4 結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝
個人簡歷

【參考文獻】

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本文編號：2886366