聚甘露糖醛酸和聚古羅糖醛酸跨Caco-2細(xì)胞單層的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制
發(fā)布時(shí)間：2020-12-04 23:10
海藻酸鈉降解得到的聚甘露糖醛酸（Polymannuronic acid,PM）和聚古羅糖醛酸（Polyguluronic acid,PG）具有優(yōu)良的生物活性。二者生物活性的發(fā)揮與其給藥方式密切相關(guān),而口服給藥系統(tǒng)是各種給藥途徑中最廣泛使用的方式,因此闡明PM和PG的口服轉(zhuǎn)運(yùn)過程對(duì)其生物活性的發(fā)揮具有重要意義。藥物的口服轉(zhuǎn)運(yùn)途徑主要包括跨細(xì)胞途徑和細(xì)胞旁途徑:多糖由于分子量（Molecular weight,Mw）大,難以透過細(xì)胞間的緊密連接（Tight junction,TJ）,因此細(xì)胞旁途徑嚴(yán)重限制了其口服轉(zhuǎn)運(yùn)過程。而多糖的跨細(xì)胞途徑包括:從頂膜內(nèi)吞的多糖分子在細(xì)胞中內(nèi)化,并最終從基底外側(cè)膜中胞吐。為了研究PM和PG的口服轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制,本實(shí)驗(yàn)采用異硫氰酸熒光素（Fluorescein isothiocyanate,FITC）標(biāo)記的方法合成FITC-PM和FITC-PG,然后在Caco-2細(xì)胞單層模型上研究了二者的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制。具體研究內(nèi)容包括以下幾個(gè)方面:1、PM和PG的熒光標(biāo)記及驗(yàn)證采用酪胺化學(xué)修飾與FITC綴合的方法合成FITC-PM和F.ITC-PG,瓊脂糖凝膠電泳法和熒光分光光度計(jì)法...
【文章來源】： 王宇 山東大學(xué)
【文章頁數(shù)】：77 頁
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
圖２－１瓊脂糖凝膠電泳圖譜
Ｍ．?｜?ＷＯ．??ｉ?ｉ?ｊ??１０－?￣?２５－?！〇〇■??２ＩＮＩ?３（ＭＩ?４００?５ＷＩ?ＭＭＩ?７？Ｉ０?ＭＩＩＯ?３〇〇?４〇〇?５〇〇?６００?７００?８００?２００?３００?４００?５００?６００?７００?８００??Ｗｎｖｒｌｅ？Ｋｌｈ?（ｒｎｎ）?（ｍｍ）??ｓ??４００－??ｉ?３００－??＇明??０?ｉ?．?１?ｒ－＂—Ｉ?ｒ－??２００?ｍ?？？〇〇?？〇〇?ｍ?？〇〇?ｔｏｏ??＞Ｖａｖｃｌｅｎｇ［（ｌｉ?（ｎｍ）??圖２－２通過熒光分光光度法驗(yàn)證ＰＭ和ＰＧ的熒光標(biāo)記。激發(fā)波長為４９５ｎｍ下未標(biāo)記的??ＰＭ?（ａ）?．?ＦＩＴＣ?和未標(biāo)記的?ＰＭ?（ｂ）?，?ＦＩＴＣ－ＰＭ?（ｃ）?，?ＰＧ?（ｄ），ＦＩＴＣ?和未標(biāo)記的?ＰＧ?（ｅ），??Ｆ１ＴＣ－ＰＧ?（ｆ）和Ｆ１ＴＣ?（ｇ）的熒光光譜。??２．３．３焚光標(biāo)記前后分子量的測定結(jié)果??通過酪胺化學(xué)修飾然后與ＨＴＣ綴合來成功合成了?ＦＩＴＣ－ＰＭ和ＦＩＴＣ－ＰＧ，??之后用高效凝膠滲透色譜法測定了熒光標(biāo)記前后ＰＭ和ＰＧ的Ｍｗ變化情況。??Ｍｗ測定的結(jié)果表明，標(biāo)記后ＰＭ和ＰＧ的Ｍｗ都稍微增大（圖２－３?（ａ－ｄ）），這??表明可能有少量的酪胺和ＦＩＴＣ基團(tuán)已綴合到ＰＭ和ＰＧ分子上。??１５??
ａ??ｍＡＵ??：：?Ａ??３０?－?Ｉ?人??ｌ?Ｍ＇?ｉ?！??〇－??－—二?＾??０?５?１０?１５?酬??ｂ?Ｐ＼１．Ｍｗ－１６．４５ｋＤ??ｍＡＵ?１?ｊｓ??，；ｊ??ｒｔ?＜５?ｍ?ｉｒ?ｍｉｎ??Ｆ１ＴＣ－ＰＭ：?Ｍｗ－１６．８０ｋＤ??１??０?ｓ?１０?ｍｉｎ??ＰＧ；?Ｍｗ＊＝?１０．６５?ｋＤ??ｄ??Ｌ?Ａｎ??丨丨?５?ｉｏ?ｉｓ?ｍｉｎ??ＨＴＣ－ＰＧ：?Ｍｗ＝１１．８９ｋＤ??圖２－３通過高效凝膠滲透色譜法測定Ｍｗ。Ｍｗ測定ＰＭ?（ａ），?ＦＩＴＣ－ＰＭ?（ｂ），ＰＧ?（ｃ），??ＦＩＴＣ－ＰＧ?（ｄ）；葡聚糖的回歸方程為?ｌｏｇＭｗ＝－０．４２０７ｔ?＋?８．９９５９?（Ｒ２?＝?０．９９９９）。??２．３．４熒光標(biāo)記率的測定結(jié)果??最后測定了?ＦＩＴＣ－ＰＭ和ＦＩＴＣ－ＰＧ的熒光標(biāo)記率ＲＬ?（％）。結(jié)果如表２－２所??示，本實(shí)驗(yàn)使用了商品化的ＦＩＴＣ－轉(zhuǎn)鐵蛋白和ＦＩＴＣ－葡聚糖作為陽性對(duì)照，并測??定了它們的平均熒光標(biāo)記率Ｒｌ?（％），分別為９８．４９％和５２．５１°／。。而ＦＩＴＣ－ＰＭ和??ＦＩＴＣ－ＰＭ的平均熒光標(biāo)記率ＲＬ?（％）較低，僅為１２．６６％和９．５２％，這與高效液??相色譜法測定的熒光標(biāo)記后Ｍｗ的稍微增大結(jié)果相一致，因?yàn)閮H有少量的酪胺和??ＦＩＴＣ綴合到ＰＭ和ＰＧ分子上。上述結(jié)果表明，ＰＭ和ＰＧ已成功被ＦＩＴＣ標(biāo)記，??可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。??１６??
本文編號(hào)：2898399
【文章來源】： 王宇 山東大學(xué)
【文章頁數(shù)】：77 頁
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
圖２－１瓊脂糖凝膠電泳圖譜
Ｍ．?｜?ＷＯ．??ｉ?ｉ?ｊ??１０－?￣?２５－?！〇〇■??２ＩＮＩ?３（ＭＩ?４００?５ＷＩ?ＭＭＩ?７？Ｉ０?ＭＩＩＯ?３〇〇?４〇〇?５〇〇?６００?７００?８００?２００?３００?４００?５００?６００?７００?８００??Ｗｎｖｒｌｅ？Ｋｌｈ?（ｒｎｎ）?（ｍｍ）??ｓ??４００－??ｉ?３００－??＇明??０?ｉ?．?１?ｒ－＂—Ｉ?ｒ－??２００?ｍ?？？〇〇?？〇〇?ｍ?？〇〇?ｔｏｏ??＞Ｖａｖｃｌｅｎｇ［（ｌｉ?（ｎｍ）??圖２－２通過熒光分光光度法驗(yàn)證ＰＭ和ＰＧ的熒光標(biāo)記。激發(fā)波長為４９５ｎｍ下未標(biāo)記的??ＰＭ?（ａ）?．?ＦＩＴＣ?和未標(biāo)記的?ＰＭ?（ｂ）?，?ＦＩＴＣ－ＰＭ?（ｃ）?，?ＰＧ?（ｄ），ＦＩＴＣ?和未標(biāo)記的?ＰＧ?（ｅ），??Ｆ１ＴＣ－ＰＧ?（ｆ）和Ｆ１ＴＣ?（ｇ）的熒光光譜。??２．３．３焚光標(biāo)記前后分子量的測定結(jié)果??通過酪胺化學(xué)修飾然后與ＨＴＣ綴合來成功合成了?ＦＩＴＣ－ＰＭ和ＦＩＴＣ－ＰＧ，??之后用高效凝膠滲透色譜法測定了熒光標(biāo)記前后ＰＭ和ＰＧ的Ｍｗ變化情況。??Ｍｗ測定的結(jié)果表明，標(biāo)記后ＰＭ和ＰＧ的Ｍｗ都稍微增大（圖２－３?（ａ－ｄ）），這??表明可能有少量的酪胺和ＦＩＴＣ基團(tuán)已綴合到ＰＭ和ＰＧ分子上。??１５??
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本文編號(hào)：2898399
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