發(fā)布時(shí)間：2024-05-19 22:39

　　目的:本研究根據(jù)課題組前期建立的免疫程序制備抗rTgPRF多克隆抗體并體外監(jiān)測(cè)其對(duì)正常細(xì)胞及弓形蟲感染細(xì)胞生長(zhǎng)、壞死和凋亡的影響。通過(guò)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)rTgPRF脂質(zhì)體或rTgPRF聯(lián)合弗氏佐劑免疫C57BL/6J小鼠后特異性抗體及CD4+/CD8+的變化,并進(jìn)一步評(píng)估兩種免疫方式對(duì)弓形蟲感染小鼠的生存期、組織病理、生殖激素、細(xì)胞因子以及凋亡相關(guān)蛋白水平的影響,進(jìn)而探討rTgPRF疫苗的保護(hù)效力及機(jī)制,為其進(jìn)一步的應(yīng)用開發(fā)提供理論支撐和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:將pET30a(+)-TgPRF質(zhì)粒轉(zhuǎn)入E.coli BL21(DE3)中大量表達(dá)rTgPRF蛋白,通過(guò)AKTA系統(tǒng)經(jīng)Ni柱和陰離子柱純化后冷凍干燥。首先,制備抗rTgPRF多克隆抗體并檢測(cè)其體外活性,將BALB/C-3T3成纖維細(xì)胞進(jìn)行鋪板后分別加入抗rTgPRF血清(1:40)或兔免疫前血清(1:40),正常對(duì)照僅補(bǔ)充培養(yǎng)基,用Incucyte Zoom^TM系統(tǒng)間隔1 h動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)抗rTgPRF抗體對(duì)正常細(xì)胞生長(zhǎng)、壞死和凋亡的影響。抗rTgPRF抗體對(duì)弓形蟲感染細(xì)胞的影響同樣進(jìn)行了檢測(cè),將細(xì)胞鋪板后預(yù)培養(yǎng)12 h,未感...

【文章頁(yè)數(shù)】：77 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1rTgPRF蛋白AKTA純化峰值圖注：A：His-親和層析純化；B：Q離子柱交換層析純化；紅色圓圈標(biāo)記為目的蛋白峰Fig.1rTgPRFproteinAKTApurificationpeakdiagramNote:A:His-affinitychromatographypurification;B:PurificationbyQ-ion-exchangechromatography;Redcirclemarkedastargetprotein

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文郭珊珊303結(jié)果3.1rTgPRF蛋白表達(dá)純化及凍干對(duì)重組蛋白進(jìn)行His-親和層析純化洗脫可發(fā)現(xiàn)當(dāng)洗脫液濃度依次為7%、15%、50%時(shí)各出現(xiàn)一峰(圖1A)，收集蛋白進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳分析顯示，15%處所收集蛋白大小約為23kD(圖2A)，為目的....

圖2rTgPRF蛋白SDS-PAGE電泳圖A:未凍干蛋白，B:凍干蛋白；M:蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)，rTgPRF:蛋白Fig.2SDS-PAGEelectrophoresisofrTgPRFproteinA:Nonlyophilizedprotein,B:lyophilized

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文郭珊珊31圖2rTgPRF蛋白SDS-PAGE電泳圖A:未凍干蛋白，B:凍干蛋白；M:蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)，rTgPRF:蛋白Fig.2SDS-PAGEelectrophoresisofrTgPRFproteinA:Nonlyophilizedprotein,B....

圖3抗rTgPRF抗體作用細(xì)胞后細(xì)胞生長(zhǎng)(A)、壞死(B)及凋亡(C)注：*表示P<0.05Fig.3Cellgrowth(A)、necrosis(B)andapoptosis(C)afterantirTgPRFantibodytreatment

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文郭珊珊32圖3抗rTgPRF抗體作用細(xì)胞后細(xì)胞生長(zhǎng)(A)、壞死(B)及凋亡(C)注：*表示P<0.05Fig.3Cellgrowth(A)、necrosis(B)andapoptosis(C)afterantirTgPRFantibodytreatment....

圖4體外培養(yǎng)BALB/C-3T3成纖維細(xì)胞84h壞死和凋亡的熒光圖注：細(xì)胞壞死用YOYO-1探針標(biāo)記為紅色熒光；凋亡用Caspase-3/7探針標(biāo)記為綠色熒光

遵義醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文郭珊珊32圖3抗rTgPRF抗體作用細(xì)胞后細(xì)胞生長(zhǎng)(A)、壞死(B)及凋亡(C)注：*表示P<0.05Fig.3Cellgrowth(A)、necrosis(B)andapoptosis(C)afterantirTgPRFantibodytreatment....

本文編號(hào)：3978556