發(fā)布時間：2018-06-17 19:39

  本文選題：金屬蛋白酶抑制劑 + 膜型TRAIL��； 參考：《第四軍醫(yī)大學(xué)》2005年博士論文

【摘要】：目的 研究蛋白酶抑制劑對膜型TRAIL(Membrane TRAIL,mTRAIL)和可溶型TRAIL(Soluble TRAIL,sTRAIL)表達(dá)與功能的調(diào)節(jié)。方法:(1)采用辛酸法純化FMU-TRAIL3單克隆抗體(Monoclonal antibody,mAb)并用SDS-PAGE鑒定。采用間接免疫熒光染色及流式細(xì)胞術(shù)檢測mTRAIL的分布;用免疫沉淀及免疫印跡方法鑒定mAb對重組TRAIL(Recombinant TRAIL,rTRAIL)和細(xì)胞裂解液中TRAIL分子的識別。應(yīng)用凋亡檢測、~(51)Cr釋放實(shí)驗鑒定FMU-TRAIL3 mAb的中和活性。(2)以不同蛋白酶抑制劑處理Jurkat、Daudi和Colo205細(xì)胞,采用間接免疫熒光染色及流式細(xì)胞術(shù)分析蛋白酶抑制劑對mTRAIL表達(dá)的影響。用RT-PCR法分析Jurkat、Daudi和Colo205細(xì)胞內(nèi)ADAM10(Adisintegrin and a metollaprotease, ADAM10)和ADAM17基因的表達(dá)。(3)分別用PMA和PHA刺激Jurkat細(xì)胞不同時間,有的實(shí)驗加入金屬蛋白酶抑制劑1,10-phenanthroline或ADAM抑制劑TAPI-1(TNF-αprotease inhibitor-1),用間接免疫熒光染色及流式細(xì)胞術(shù)分析mTRAIL表達(dá);用ELISA檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中sTRAIL水平。并觀察IFN-α和金
[Abstract]:Objective to investigate the regulation of protease inhibitor on the expression and function of membrane TRAILMembrane trail and soluble TRAILLE Soluble TRAILSTRAIL. Methods FMU-TRAIL3 monoclonal antibody (FMU-TRAIL3) was purified by octanoic acid method and identified by SDS-PAGE. The distribution of mTRAIL was detected by indirect immunofluorescence staining and flow cytometry, and the recognition of recombinant trail Recombinant trail rTRAIL and trail in cell lysate was identified by immunoprecipitation and immunoblotting methods. The neutralization activity of FMU-TRAIL3 mAb was assayed by apoptosis assay. The neutralization activity of FMU-TRAIL3 mAb was assayed with different protease inhibitors. Jurkatron Daudi and Colo205 cells were treated with different protease inhibitors. The effects of protease inhibitors on the expression of mTRAIL were analyzed by indirect immunofluorescence staining and flow cytometry. The expression of ADAM10Adisintegrin and a metollaprotease, (ADAM10) and ADAM17 gene in Jurkatine Daudi and Colo205 cells were analyzed by RT-PCR. The expression of ADAM17 gene in Jurkat cells was stimulated by PMA and PHA at different time points, respectively. In some experiments, the expression of mTRAIL was detected by indirect immunofluorescence staining and flow cytometry, and the level of sTRAIL in the supernatant of cell culture was detected by Elisa, and the expression of mTRAIL was detected by indirect immunofluorescence staining and flow cytometry, by adding metalloproteinase inhibitor 1-phenanthroline or Adam inhibitor TAPI-1TNF- 偽 protease inhibitor. IFN- 偽 and gold were observed.
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R392

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本文編號：2032225