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球形幽門螺桿菌高表達基因的篩選及其克隆與真核表達

發(fā)布時間:2020-12-26 23:13
  目的:從基因轉(zhuǎn)錄水平了解球形幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)基因表達的變化,選擇在球形菌中相對高表達的兩個基因克隆入真核表達載體并檢測其表達,為抗球形菌DNA疫苗的研制奠定基礎(chǔ)。 方法:1.幽門螺桿菌標準株NCTC11637和2株臨床分離株,經(jīng)抗生素—滅滴靈誘導(dǎo)球變。提取等菌量螺旋形和球形Hp的RNA,RT-PCR擴增Hp 25種基因,這些基因包括毒力基因(kat、aphA、rdxA、frxA、cysS、sodB、ureB、glmM、cagA、vacA、fldA、iceAl、hpaA、fliD、napA、oipA、alpAB、babB、hopZ);看家基因(scoB、atpD、glnA、recA)和功能不明的外膜蛋白基因(hopW、hopX)。擴增產(chǎn)物經(jīng)分子定量成像系統(tǒng)進行掃描定量。2.選擇表達變化較小的兩個基因(即相對高表達基因)glmM、oipA,將其全長基因克隆入T載體進行序列測定,再將其開放讀碼框架(ORF)克隆入真核表達載體pVAX1。重組質(zhì)粒glmM/pVAX1、oipA/pVAX1經(jīng)大量擴增后,瞬時轉(zhuǎn)染胃腺癌細胞系SGC-7901,用pSE... 

【文章來源】:福建醫(yī)科大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】:57 頁

【學(xué)位級別】:碩士

【文章目錄】:
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 球形與螺旋形幽門螺桿菌基因表達差異比較
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
第二部分 幽門螺桿菌毒力基因oipA和glmM的克隆及真核表達
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
結(jié)論
參考文獻
綜述
致謝



本文編號:2940620

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