發(fā)布時(shí)間：2024-06-07 04:07

　　目的探討腸道病毒71型(enterovirus 71,EV71)和柯薩奇病毒A組16型(coxsakievirus A 16,CA16)VP1蛋白在人支氣管上皮細(xì)胞中對(duì)天然免疫相關(guān)信號(hào)分子的表達(dá)及T細(xì)胞免疫反應(yīng)的影響。方法經(jīng)RT-PCR法擴(kuò)增EV71和CA16的VP1序列,插入至載體pcDNA3. 1(+),構(gòu)建重組真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA-EV71-VP1和pcDNA-CA16-VP1。分別轉(zhuǎn)染人支氣管上皮細(xì)胞16HBE,于轉(zhuǎn)染后24、48和72 h收集樣本,進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)天然免疫相關(guān)信號(hào)分子表達(dá)的檢測(cè)和刺激T細(xì)胞增殖的檢測(cè)。結(jié)果經(jīng)雙酶切及測(cè)序鑒定,重組真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA-EV71-VP1和pcDNA-CA16-VP1構(gòu)建正確。與陰性對(duì)照組比較,EV71-VP1組IFNγ、OX40L、RANKL、TNF-α和IL-2的水平上調(diào),而CA16-VP1組的上調(diào)幅度較小。EV71-VP1及CA16-VP1組16HBE細(xì)胞的胞內(nèi)外提取物均可明顯刺激分泌IFNγ的T細(xì)胞增殖(P <0. 05)。結(jié)論 EV71和CA16 VP1蛋白在人上皮細(xì)胞16HBE中表達(dá)后,可差異性誘導(dǎo)細(xì)胞中天然免疫信號(hào)...

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 毒株、質(zhì)粒及細(xì)胞
    1.2 血液
    1.3 主要試劑
    1.4 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
    1.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
    1.6 轉(zhuǎn)染細(xì)胞中VP1基因的m RNA轉(zhuǎn)錄水平檢測(cè)
    1.7 轉(zhuǎn)染細(xì)胞中VP1蛋白水平的檢測(cè)
    1.8 轉(zhuǎn)染細(xì)胞中天然免疫反應(yīng)相關(guān)信號(hào)分子表達(dá)趨勢(shì)的動(dòng)力學(xué)檢測(cè)
    1.9 人T細(xì)胞流式分選
    1.1 0 轉(zhuǎn)染細(xì)胞內(nèi)外產(chǎn)物對(duì)T細(xì)胞非特異性增殖刺激效應(yīng)的檢測(cè)
    1.1 1 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 目的基因PCR產(chǎn)物的鑒定
    2.2 重組質(zhì)粒的鑒定
    2.3 轉(zhuǎn)染細(xì)胞中VP1基因m RNA的轉(zhuǎn)錄水平
    2.4 轉(zhuǎn)染細(xì)胞中VP1蛋白的水平
    2.5 EV71和CA16 VP1蛋白對(duì)16HBE細(xì)胞內(nèi)天然免疫相關(guān)信號(hào)分子反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)作用
    2.6 轉(zhuǎn)染細(xì)胞內(nèi)外產(chǎn)物對(duì)T細(xì)胞非特異性增殖的刺激效應(yīng)
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