發(fā)布時間：2024-06-29 14:33

　　一目的： 1 構(gòu)建腺相關(guān)病毒增強(qiáng)型小鼠白介素10質(zhì)粒(pORF-ITR-mIL-10)并進(jìn)一步證實ITR能增加mIL-10在心肌細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)，為體內(nèi)實驗提供必要的實驗依據(jù)。 二方法： 1 利用分子克隆技術(shù)，將AAV中的ITR插在pORF5-mIL-10質(zhì)粒啟動子的上游，構(gòu)建pORF-ITR-mIL-10質(zhì)粒。 2 在陽離子脂質(zhì)體Lipofectin介導(dǎo)下，pORF5-mIL-10和pORF-ITRS-mIL-10分別轉(zhuǎn)染原代培養(yǎng)心肌細(xì)胞。 3 Trizol一步法提取總RNA，RT-PCR檢測mIL-10的mRNA。 4 ELISA檢測培養(yǎng)細(xì)胞上清中mIL-10的表達(dá)。 三結(jié)果： 1 用雙酶切方法證實成功構(gòu)建pORF-ITR-mIL-10。 2 分別在轉(zhuǎn)染24h、48h、72h、96h、120h后，用RT-PCR在心肌細(xì)胞中檢測到相應(yīng)的目的條帶。 3 ELISA檢測顯示pORF-ITR-mIL-10的表達(dá)量明顯高于pORF5-mIL-10。 四結(jié)論： 1 在陽離子脂質(zhì)體Lipofectin介導(dǎo)...

【文章頁數(shù)】：33 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
一、 論文摘要
    前言
    中文摘要
    英文摘要
二、 論文
    材料
    腺相關(guān)病毒增強(qiáng)型mIL-10質(zhì)粒的構(gòu)建
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
三、 綜述
    正文
    參考文獻(xiàn)
四、 致謝



本文編號：3997697