金納米探針結合暗場顯微鏡定量檢測肺炎衣原體的研究
發(fā)布時間：2020-12-17 01:26
肺炎衣原體（Chlamydia pneumoniae,C.pneumoniae,C.pn）是一種專性胞內寄生的衣原體屬微生物,能夠感染人和馬、考拉等多種家養(yǎng)及野生動物,是一種重要的人畜共患病原體。C.pn急性感染會導致咽炎、鼻竇炎、支氣管炎、肺炎等一系列呼吸系統疾病,慢性持續(xù)感染則與肺癌、哮喘、阿爾茲海默病和冠心病等重要心血管疾病的致病原因密切相關。由于缺乏特征性臨床癥狀,因此需要在實驗室進一步進行鑒定。目前臨床檢測手段主要包括分離培養(yǎng)法、酶聯免疫吸附反應（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）、微量免疫熒光試驗（Micro-immunofluorescence,MIF）、PCR分子檢測技術等。但分離培養(yǎng)法耗時長,對早期診斷意義不大。Cpn感染中特異性IgG、IgM上升緩慢,血清學檢測會貽誤檢測時間。PCR方法操作復雜,對檢測環(huán)境要求較高,易產生假陽性,導致難以商業(yè)化,一般用于實驗研究。目前缺乏一種對環(huán)境要求低,高靈敏、易操作的C.pn檢測技術。納米材料應用于生物傳感器的設計已經在生命科學等多個領域受到了廣泛研究,利用納米材料獨特的光學性質、磁...
【文章來源】：揚州大學江蘇省
【文章頁數】：70 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
圖１－１細胞形態(tài)的變化
３．３?Ｃ．／ｗ的ＲＴ－ｑＰＣＲ檢測法的建立??３．３．１?〇？？的ＲＴ－ｑＰＣＲ檢測法特異性的判定??ＰＣＲ程序完成后，分析各檢測樣品的高分辨率熔解曲線（圖１－３），其中Ｃ．ｐ？樣品會??在相應６５°Ｃ處形成溶解峰，同時此ＲＴ－ｑＰＣＲ方法不會擴增ｃｏ／；＇的核酸樣??品和妙／ｚ／ｍｗｒ／畫的核酸樣品。??０．３０?＂Ｉ???０?２５?／＼?￣?Ｃ，Ｐｎ??／?＼?—?Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ?ｔｙｐｈｉｍｗｌｕｍ??〇?０?２０－?／?＼?一￣?Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ?ｃｏｌｉ??蕓?ｉ?Ｖ?—￣?Ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ??！?°－１５－?ｙ?＼??ｉ?０－１０?■一＼??ｓ?０．０５－?＼??丫．????？０．０５－??５４?５６?５８?６０?６２?６４?６６?６８?７０?７２?７４?７６?７８??Ｔｅｍｐｅｒａ?ｔｉｌ?ｒｅ＾Ｃ）??圖１－３高分辨率熔解曲線。??Ｆｉｇ．?１－３?Ｈｉｇｈ?ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ?ｍｅｌｔｉｎｇ?ｃｕｒｖｅ．??３．３．２細胞培養(yǎng)Ｃ，樣品的檢測??采用己建立的ＲＴ－ｑＰＣＲ系統，擴增經ＰｉｃｏＧｒｅｅｎ法定量后梯度稀釋為１０５、Ｉ０４、１０３、??１０２、１０１、１０Ｑｃｏｐｉｅｓ／（ｘＬ的Ｃ．ｐ？核酸樣品，結果顯示，除ｌＯＧｃｏｐｉｅｓ／ｆｉＬＣ．／ｗ核酸樣品結果??為陰性，其他各濃度的樣品高分辨熔解曲線峰值和峰形保持一致，且擴增曲線峰形相似，??循環(huán)閾值（Ｃｔ值）均小于４０，判斷均為陽性，證明該方法重復性較好，可用于Ｃ．／ｗ定量??檢測。將如上核酸樣品作為標準品與細胞培養(yǎng)的新鮮核酸樣品同時進行ＰＣＲ反應
３．結果??３．１探針制備及配比優(yōu)化??各種成分比例的探針電泳結果（圖２－１）顯示，ＧＮＰ＠ｐｒｏｔｅｉｎＡ和抗體可以得到大小??不同的蛋白條帶，各探針中均包含兩種蛋白條帶，說明該探針制備方法是可行的，抗體己??成功修飾ＧＮＰ＠ｐｒｏｔｅｉｎＡ。質量比例為３：２、３：４和３：８的探針電泳條帶中抗體條帶逐漸變??濃，而質量比例３：１０和３：１２的探針電泳條帶中抗體條帶濃度與前一條帶保持相同，說明??質量比例為３：８的探針是最適比例，前兩種質量比例中抗體量不足，而后兩種質量比例則??是抗體量過剩�？贵w量過少會影響探針與Ｃ．ｐｎ的結合效率，而抗體量過多會造成金納米材??料聚團，影響其分散性。后續(xù)探針均采用３：?８的成分質量配比，制備過程可見（圖２－２），??探針清洗過程中并未損耗太多ＧＮＰ＠ｐｒｏｔｅｉｎ?Ａ，重懸后的探針工作液與同濃度??ＧＮＰ＠ｐｒｏｔｅｉｎＡ液體的均勾度基本一致，分散性未受太大影卩向。??ａｂｃｄｅｆ?ｇ?ｈ??１２０??ｉ〇〇?ｊｈｈ??
【參考文獻】：
期刊論文
[1]肺炎衣原體所致急性呼吸道感染的臨床特征及分布情況[J]. 吐爾洪·阿不來提,努力曼·阿不力米提. 世界最新醫(yī)學信息文摘. 2018(69)
[2]單個等離子體納米顆粒在生化分析和生物成像中的應用[J]. 雷剛,何彥. 物理化學學報. 2018(01)
[3]肺炎衣原體實驗室診斷技術研究進展[J]. 胡文娟,郭東星,辛德莉. 傳染病信息. 2016(03)
[4]肺炎衣原體Taqman探針實時熒光定量PCR檢測法[J]. 程永婷,賈曉暉,馬良,賈天軍. 臨床檢驗雜志. 2016(05)
[5]利用環(huán)介導等溫擴增技術檢測兒童咽拭子標本中肺炎支原體[J]. 李丹,李靜宜,董艷青,任翊,田秀君,辛德莉. 山東大學學報(醫(yī)學版). 2014(10)
[6]實時熒光定量PCR的原理及應用研究進展[J]. 尹兵. 科技信息. 2010(17)
本文編號：2921151
【文章來源】：揚州大學江蘇省
【文章頁數】：70 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
圖１－１細胞形態(tài)的變化
３．３?Ｃ．／ｗ的ＲＴ－ｑＰＣＲ檢測法的建立??３．３．１?〇？？的ＲＴ－ｑＰＣＲ檢測法特異性的判定??ＰＣＲ程序完成后，分析各檢測樣品的高分辨率熔解曲線（圖１－３），其中Ｃ．ｐ？樣品會??在相應６５°Ｃ處形成溶解峰，同時此ＲＴ－ｑＰＣＲ方法不會擴增ｃｏ／；＇的核酸樣??品和妙／ｚ／ｍｗｒ／畫的核酸樣品。??０．３０?＂Ｉ???０?２５?／＼?￣?Ｃ，Ｐｎ??／?＼?—?Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ?ｔｙｐｈｉｍｗｌｕｍ??〇?０?２０－?／?＼?一￣?Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ?ｃｏｌｉ??蕓?ｉ?Ｖ?—￣?Ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ??！?°－１５－?ｙ?＼??ｉ?０－１０?■一＼??ｓ?０．０５－?＼??丫．????？０．０５－??５４?５６?５８?６０?６２?６４?６６?６８?７０?７２?７４?７６?７８??Ｔｅｍｐｅｒａ?ｔｉｌ?ｒｅ＾Ｃ）??圖１－３高分辨率熔解曲線。??Ｆｉｇ．?１－３?Ｈｉｇｈ?ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ?ｍｅｌｔｉｎｇ?ｃｕｒｖｅ．??３．３．２細胞培養(yǎng)Ｃ，樣品的檢測??采用己建立的ＲＴ－ｑＰＣＲ系統，擴增經ＰｉｃｏＧｒｅｅｎ法定量后梯度稀釋為１０５、Ｉ０４、１０３、??１０２、１０１、１０Ｑｃｏｐｉｅｓ／（ｘＬ的Ｃ．ｐ？核酸樣品，結果顯示，除ｌＯＧｃｏｐｉｅｓ／ｆｉＬＣ．／ｗ核酸樣品結果??為陰性，其他各濃度的樣品高分辨熔解曲線峰值和峰形保持一致，且擴增曲線峰形相似，??循環(huán)閾值（Ｃｔ值）均小于４０，判斷均為陽性，證明該方法重復性較好，可用于Ｃ．／ｗ定量??檢測。將如上核酸樣品作為標準品與細胞培養(yǎng)的新鮮核酸樣品同時進行ＰＣＲ反應
３．結果??３．１探針制備及配比優(yōu)化??各種成分比例的探針電泳結果（圖２－１）顯示，ＧＮＰ＠ｐｒｏｔｅｉｎＡ和抗體可以得到大小??不同的蛋白條帶，各探針中均包含兩種蛋白條帶，說明該探針制備方法是可行的，抗體己??成功修飾ＧＮＰ＠ｐｒｏｔｅｉｎＡ。質量比例為３：２、３：４和３：８的探針電泳條帶中抗體條帶逐漸變??濃，而質量比例３：１０和３：１２的探針電泳條帶中抗體條帶濃度與前一條帶保持相同，說明??質量比例為３：８的探針是最適比例，前兩種質量比例中抗體量不足，而后兩種質量比例則??是抗體量過剩�？贵w量過少會影響探針與Ｃ．ｐｎ的結合效率，而抗體量過多會造成金納米材??料聚團，影響其分散性。后續(xù)探針均采用３：?８的成分質量配比，制備過程可見（圖２－２），??探針清洗過程中并未損耗太多ＧＮＰ＠ｐｒｏｔｅｉｎ?Ａ，重懸后的探針工作液與同濃度??ＧＮＰ＠ｐｒｏｔｅｉｎＡ液體的均勾度基本一致，分散性未受太大影卩向。??ａｂｃｄｅｆ?ｇ?ｈ??１２０??ｉ〇〇?ｊｈｈ??
【參考文獻】：
期刊論文
[1]肺炎衣原體所致急性呼吸道感染的臨床特征及分布情況[J]. 吐爾洪·阿不來提,努力曼·阿不力米提. 世界最新醫(yī)學信息文摘. 2018(69)
[2]單個等離子體納米顆粒在生化分析和生物成像中的應用[J]. 雷剛,何彥. 物理化學學報. 2018(01)
[3]肺炎衣原體實驗室診斷技術研究進展[J]. 胡文娟,郭東星,辛德莉. 傳染病信息. 2016(03)
[4]肺炎衣原體Taqman探針實時熒光定量PCR檢測法[J]. 程永婷,賈曉暉,馬良,賈天軍. 臨床檢驗雜志. 2016(05)
[5]利用環(huán)介導等溫擴增技術檢測兒童咽拭子標本中肺炎支原體[J]. 李丹,李靜宜,董艷青,任翊,田秀君,辛德莉. 山東大學學報(醫(yī)學版). 2014(10)
[6]實時熒光定量PCR的原理及應用研究進展[J]. 尹兵. 科技信息. 2010(17)
本文編號：2921151
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