發(fā)布時(shí)間：2025-06-20 05:48

　　 【目的】為探討綿羊乳腺金黃色葡萄球菌感染后血常規(guī)及其外周血細(xì)胞因子表達(dá)變化規(guī)律.【方法】選擇健康泌乳期小尾寒羊5只,分別從乳頭灌注金黃色葡萄球菌菌液0.5 mL(3×10³ cfu/mL),在灌注前0 h及灌注后12、24、36、48、72、96 h經(jīng)綿羊頸靜脈采集血液,用動物血球分析儀測定血常規(guī),同時(shí)運(yùn)用qRT-PCR方法檢測外周血細(xì)胞因子（IFN-α、IL-1β、IL-16和TNF-α）mRNA的相對表達(dá)量,用ELISA方法檢測血清中細(xì)胞因子（IFN-α、IL-1β、IL-16和TNF-α）的濃度.【結(jié)果】外周血白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞總數(shù)在綿羊乳腺金黃色葡萄球菌感染后24 h顯著低于感染前,48 h時(shí)表現(xiàn)出上升趨勢;金黃色葡萄球菌感染后12、24 h,IFN-α、IL-1β、IL-16及TNF-α的mRNA表達(dá)量顯著或極顯著升高,感染后36 h各細(xì)胞因子mRNA表達(dá)量均達(dá)到峰值,48 h時(shí)表現(xiàn)出下降趨勢;血清中IFN-α、IL-1β、IL-16及TNF-α濃度于感染后12 h或24 h顯著升高,感染后24 h或36 h達(dá)到峰值,感染后48 h時(shí)各細(xì)胞因子濃...

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

圖1 細(xì)胞因子及β-actin PCR擴(kuò)增產(chǎn)物

將反轉(zhuǎn)錄好的cDNA作為模板,TNF-α、IFN-α、IL-16及IL-1β和內(nèi)參基因β-actin為特異性引物進(jìn)行擴(kuò)增,PCR產(chǎn)物進(jìn)行1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測,分別在預(yù)期分子量處出現(xiàn)強(qiáng)弱不同的電泳條帶,如圖1所示.2.3實(shí)時(shí)熒光定量PCR產(chǎn)物的特異性

圖2 CKs基因SYBR Green I Real-time PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物的熔解曲線

qRT-PCR擴(kuò)增結(jié)果顯示本試驗(yàn)設(shè)計(jì)的特異引物擴(kuò)增效果良好,溶解曲線只有一個(gè)特異性峰出現(xiàn),說明擴(kuò)增過程中無引物二聚體和非特異性產(chǎn)物出現(xiàn)(圖2).2.4CKs基因mRNA的相對表達(dá)量檢測結(jié)果

圖3 金黃色葡萄球菌感染后血清中CKs基因mRNA

由圖4可知,在感染金黃色葡萄球菌12h后,綿羊血清中的IL-1β和IL-16的濃度開始顯著上升,感染24h后血清中IFN-α和IL-16的濃度顯著高于0h,IL-1β極顯著高于0h;IFN-α和IL-16濃度在感染24h后達(dá)到峰值,IL-1β和TNF-α于感染后36h....

圖4 感染金黃色葡萄球菌后血清中CKs的濃度

圖3金黃色葡萄球菌感染后血清中CKs基因mRNA

本文編號：4051520