發(fā)布時(shí)間：2025-06-20 23:13

　　 【目的】探究鴨原代肝細(xì)胞脂質(zhì)含量與碳水化合物反應(yīng)元件結(jié)合蛋白基因(ChREBP)表達(dá)的關(guān)聯(lián)性,為深入研究ChREBP基因?qū)π笄葜�質(zhì)代謝的遺傳調(diào)控機(jī)制提供參考依據(jù)�！痉椒ā坎捎芒粜湍z原酶消化法分離孵化21 d的鴨胚原代肝細(xì)胞,以DMEM高糖培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。利用RT-PCR擴(kuò)增鴨ChREBP基因編碼區(qū)(CDS)序列,構(gòu)建攜帶His標(biāo)簽的真核表達(dá)載體pEGFP-N3-ChREBP-His,通過脂質(zhì)體法分別轉(zhuǎn)染鴨胚原代肝細(xì)胞和人前列腺癌細(xì)胞(PC3);采用His標(biāo)簽檢測試劑盒檢測ChREBP基因的表達(dá)量,以脂質(zhì)指標(biāo)測定試劑盒測定甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)的含量,并分析鴨胚原代肝細(xì)胞和PC3細(xì)胞中ChREBP基因表達(dá)與脂質(zhì)指標(biāo)含量的相關(guān)性。【結(jié)果】以構(gòu)建的真核表達(dá)載體pEGFP-N3-ChREBP-His轉(zhuǎn)染鴨原代肝細(xì)胞和PC3細(xì)胞均能發(fā)出綠色熒光,表明攜帶His標(biāo)簽的ChREBP基因能在鴨原代肝細(xì)胞和PC3細(xì)胞中表達(dá)。ChREBP基因表達(dá)量與鴨原代肝細(xì)胞和PC3細(xì)胞中的TG、TC和HDL含量均呈極顯著正相關(guān)(P<0.01,下同),與...

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【部分圖文】：

圖1 鴨原代肝細(xì)胞初分離效果檢測

以EcoRI和KpnI雙酶切pEGFP-N3載體和重組質(zhì)粒pUCm-T-ChREBP，純化回收攜帶黏性末端的目的片段，T4連接酶作用構(gòu)建真核表達(dá)載體pEGFP-N3-ChREBP-His，經(jīng)雙酶切鑒定、菌液PCR擴(kuò)增及測序驗(yàn)證，結(jié)果（圖4）表明已成功構(gòu)建獲得真核表達(dá)載體pE....

圖2 鴨原代肝細(xì)胞培養(yǎng)貼壁情況（×200)

圖1鴨原代肝細(xì)胞初分離效果檢測圖3PC3細(xì)胞培養(yǎng)貼壁情況（×200)

圖3 PC3細(xì)胞培養(yǎng)貼壁情況（×200)

圖2鴨原代肝細(xì)胞培養(yǎng)貼壁情況（×200)圖4真核表達(dá)載體pEGFP-N3-ChREBP-His的雙酶切鑒定（左）及菌液PCR擴(kuò)增（右）電泳結(jié)果

圖4 真核表達(dá)載體pEGFP-N3-ChREBP-His的雙酶切鑒定（左）及菌液PCR擴(kuò)增（右）電泳結(jié)果

圖3PC3細(xì)胞培養(yǎng)貼壁情況（×200)2.4真核表達(dá)載體pEGFP-N3-ChREBP-His轉(zhuǎn)染鴨原代肝細(xì)胞和PC3細(xì)胞的效果

本文編號(hào)：4051540