發(fā)布時(shí)間：2020-10-30 18:38

　　 目的:創(chuàng)傷性腦損傷是由銳器或突然的暴力作用于頭部造成的一種后天型腦組織器質(zhì)性損傷。創(chuàng)傷性腦損傷包括首次和二次損傷,首次損傷后便立即伴隨著繼發(fā)性損傷,它是造成中樞神經(jīng)損傷不易修復(fù)的重要因素。核因子E2相關(guān)因子2(Nucleus factor E2-related factor,Nrf2)在許多神經(jīng)退行性病變中具有神經(jīng)保護(hù)作用。前期研究抑制ERK信號(hào)通路可以改善神經(jīng)功能,但對(duì)于Nrf2-ARE信號(hào)通路與細(xì)胞外調(diào)節(jié)激酶(Extracellular signal-regulated kinases,ERK)信號(hào)通路之間的相關(guān)性并沒(méi)有詳細(xì)的報(bào)道。因此,我們以黑質(zhì)紋狀體通路損傷為模型來(lái)研究二者之間的相關(guān)性。我們推測(cè)通過(guò)抑制ERK可以活化Nrf2信號(hào)通路并抑制氧化應(yīng)激,從而促進(jìn)腦損傷后神經(jīng)功能的恢復(fù)。研究方法:隨機(jī)選取雄性昆明小鼠分為假手術(shù)組,黑質(zhì)紋狀體通路損傷組(traumatic brain injury,TBI),TBI+萊菔硫烷(sulforaphane,SFN)給藥組,TBI+U0126(ERK抑制劑)給藥組。以黑質(zhì)紋狀體通路損傷為模型,損傷后立即進(jìn)行腹腔注射SFN(5mg/kg),為防止二次損傷立即將U0126(3μg/μL)行損傷原位給藥。利用Western blot檢測(cè)Nrf2在損傷周圍組織細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核中的表達(dá),以及HO-1,NQO1,p-ERK和GFAP在損傷前后及給藥后蛋白表達(dá)量;利用免疫熒光組化-檢測(cè)損傷周圍星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物GFAP以及Nrf2在星形膠質(zhì)細(xì)胞中的定位表達(dá);利用超氧化物歧化酶試劑盒檢測(cè)損傷前后及給藥后SOD活力值以查看氧化應(yīng)激水平;通過(guò)動(dòng)物行為學(xué)實(shí)驗(yàn)如抓力實(shí)驗(yàn),以及神經(jīng)功能評(píng)分檢測(cè)損傷后給予SFN,U0126,對(duì)神經(jīng)功能恢復(fù)的影響。結(jié)果:1.我們應(yīng)用Western blot和免疫熒光組化檢測(cè)了損傷后1,4,7,和14天后損傷周圍星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物GFAP的表達(dá),損傷后4天時(shí)GFAP達(dá)到峰值,4天時(shí)損傷周圍的星形膠質(zhì)細(xì)胞胞體肥大(hypertrophy),突起縮短變粗。2.我們觀測(cè)到假手術(shù)組中Nrf2表達(dá)較低,只存在于星形膠質(zhì)細(xì)胞的胞質(zhì)中,損傷后Nrf2信號(hào)通路激活,核內(nèi)表達(dá)上升,胞質(zhì)內(nèi)減少,SFN激動(dòng)劑治療后入核增多,胞質(zhì)內(nèi)明顯有降低趨勢(shì)。3.U0126給藥后核內(nèi)Nrf2表達(dá)略高于損傷組,胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)略低于損傷組,說(shuō)明U0126給藥后對(duì)Nrf2入核有促進(jìn)作用。4.損傷后HO-1,NQO1表達(dá)略升高,SFN給藥后表達(dá)明顯增加,U0126給藥后HO-1,NQO1表達(dá)也高于損傷組。5.損傷后p-ERK表達(dá)明顯增加,SFN給藥后表達(dá)減少,U0126給藥后明顯抑制了p-ERK的表達(dá)。6.損傷后SOD表達(dá)明顯減少,SFN,U0126給藥后表達(dá)明顯上升。7.行為學(xué)結(jié)果發(fā)現(xiàn),SFN和U0126降低了神經(jīng)功能評(píng)分,并加強(qiáng)了小鼠的抓力。結(jié)論:SFN,U0126給藥后加強(qiáng)了Nrf2信號(hào)通路激活,使Ⅱ相解毒酶HO-1,NQO1,超氧化物歧化酶的表達(dá)升高,有效抵抗氧化應(yīng)激促進(jìn)了神經(jīng)功能恢復(fù),且通過(guò)抑制ERK減少了反應(yīng)性膠質(zhì)細(xì)胞增殖活化。因此抑制ERK信號(hào)通路能夠上調(diào)Nrf2表達(dá),加強(qiáng)內(nèi)源性抗氧化系統(tǒng)促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)。
【學(xué)位單位】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R651.15
【部分圖文】：

中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文3 結(jié)果3.1 腦損傷后星形膠質(zhì)細(xì)胞活化首先我們應(yīng)用 Western blot 和免疫熒光組化檢測(cè)了損傷后 1，4，7，和 14 天后損傷周圍星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物GFAP的表達(dá)，損傷后4天時(shí)GFAP達(dá)到峰值（圖1），4 天時(shí)損傷周圍胞體肥大，突起縮短變粗(圖 2)。

圖 3 損傷及給藥組 Nrf2 在胞質(zhì)胞核分布情況圖 3 為 Western blot 檢測(cè) Nrf2 在損傷組和給藥組，胞質(zhì)胞核分布的表達(dá)情況； * P ≤ 0.05,*** P ≤ 0.001，與假手術(shù)組比較，# P ≤ 0.05, ## P ≤ 0.01,### P ≤ 0.001 表示與損傷組比較；所有結(jié)果均用 x±s 表示。

圖 3 損傷及給藥組 Nrf2 在胞質(zhì)胞核分布情況圖 3 為 Western blot 檢測(cè) Nrf2 在損傷組和給藥組，胞質(zhì)胞核分布的表達(dá)情況； * P ≤ 0.05,*** P ≤ 0.001，與假手術(shù)組比較，# P ≤ 0.05, ## P ≤ 0.01,### P ≤ 0.001 表示與損傷組比較；所有結(jié)果均用 x±s 表示。
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