發(fā)布時(shí)間：2024-06-11 19:44

　　目的：探討犬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)體外分離、純化、擴(kuò)增的方法，證實(shí)其自我更新能力及多向分化潛能，為細(xì)胞移植治療急性心肌梗死(AMI)做準(zhǔn)備。 方法：無(wú)菌條件下用骨髓穿刺針獲取骨髓液，用密度為1.073g/ml的Percoll分離液通過(guò)密度梯度離心法獲取骨髓單個(gè)核細(xì)胞，用含10%胎牛血清的低糖DMEM培養(yǎng)液種植細(xì)胞，通過(guò)貼壁篩選法獲得純化的MSCs。細(xì)胞生長(zhǎng)融合達(dá)80%左右時(shí)，用胰酶消化傳代細(xì)胞，細(xì)胞消化、傳代培養(yǎng)三代后，可獲得大量的純度較高的MSCs。對(duì)不同代MSCs進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，并繪制生長(zhǎng)曲線，觀察細(xì)胞生長(zhǎng)特性。應(yīng)用流式細(xì)胞儀對(duì)MSCs表面標(biāo)記蛋白CD29、CD34進(jìn)行表面抗原鑒定。取第3代MSCs分別進(jìn)行成骨組織以及脂肪組織的誘導(dǎo)分化，通過(guò)茜素紅以及油紅O染色檢測(cè)是否誘導(dǎo)分化為成骨組織以及脂肪組織。 結(jié)果：采用密度梯度法獲得犬骨髓單個(gè)核細(xì)胞，剛分離的細(xì)胞體積較小，呈圓形。細(xì)胞培養(yǎng)72小時(shí)后觀察可見(jiàn)單個(gè)或少量成集落樣生長(zhǎng)的貼壁細(xì)胞克隆，形態(tài)大多呈短梭形，原代細(xì)胞培養(yǎng)10-12天達(dá)到傳代標(biāo)準(zhǔn)。細(xì)胞傳代后增殖較快，MSCs生長(zhǎng)曲線繪制顯示，MSCs生長(zhǎng)曲線呈S型，第6-7天生長(zhǎng)達(dá)到...

【文章頁(yè)數(shù)】：93 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 犬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外分離、培養(yǎng)及其生物學(xué)性質(zhì)的研究
    1 材料和方法
    2 結(jié)果
    3 討論
    4 小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
    附圖
第二部分 多功能心腔內(nèi)導(dǎo)管移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療急性心肌梗死的實(shí)驗(yàn)研究
    第一節(jié) 多功能心腔內(nèi)導(dǎo)管移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)犬梗死心肌血管新生的影響
        1 材料和方法
        2 結(jié)果
        3 討論
        4 小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
        附圖
    第二節(jié) 多功能心腔內(nèi)導(dǎo)管移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)犬心室重構(gòu)的影響
        1 材料和方法
        2 結(jié)果
        3 討論
        4 小結(jié)
        參考文獻(xiàn)
        附圖
全文小結(jié)
本研究的局限性
文獻(xiàn)綜述一
    參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀博士期間發(fā)表論文



本文編號(hào)：3992621