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不同品系A(chǔ)poe -/- 小鼠頸動(dòng)脈結(jié)扎后內(nèi)膜增生的比較及N-乙酰半胱氨酸(NAC)的干預(yù)研究

發(fā)布時(shí)間:2025-06-06 02:29
  目的:腦卒中是我國(guó)成年人致殘的重要原因,嚴(yán)重影響病患的勞動(dòng)能力和生活質(zhì)量。頸動(dòng)脈動(dòng)脈硬化是缺血性腦卒中的主要原因之一,頸動(dòng)脈狹窄或閉塞的介入腔內(nèi)治療短期效果良好,但動(dòng)脈成形術(shù)后再狹窄或閉塞仍是目前臨床治療面臨的難題。動(dòng)脈內(nèi)膜增生是介入治療后再狹窄的主要病理過程,前期的研究發(fā)現(xiàn)載脂蛋白E敲除的小鼠高脂飲食條件下結(jié)扎頸動(dòng)脈可以在短期內(nèi)出現(xiàn)頸動(dòng)脈硬化病變,病變從由巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞組成的脂肪條紋發(fā)展到包含平滑肌細(xì)胞的纖維斑塊,再發(fā)展到含有新生血管的嚴(yán)重管腔狹窄,在增生的動(dòng)脈內(nèi)膜中我們可以觀察到巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)和中層遷移而來的血管平滑肌細(xì)胞(VSMC),前期的研究發(fā)現(xiàn)局部的炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激是影響血管平滑肌細(xì)胞遷移和增殖的影響因素。C3H/HeJ(C3H)和C57BL6(B6)載脂蛋白E敲除小鼠在動(dòng)脈硬化遺傳易感性存在較大差異,分析這兩種品系小鼠動(dòng)脈內(nèi)膜增生病變成分的差異有助于分析二者動(dòng)脈硬化遺傳易感性差異的機(jī)制。本研究首先通過比較上述兩種品系小鼠高脂飲食下動(dòng)脈內(nèi)膜增生病變的成分差異,分析出可能影響早期動(dòng)脈內(nèi)膜增生的因素。然后通過干預(yù)病變巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)和干預(yù)病變局部的氧化應(yīng)激...

【文章頁數(shù)】:103 頁

【學(xué)位級(jí)別】:博士

【文章目錄】:
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分:C57BL/6-Apoe-/-與C3H-Apoe-/-小鼠頸動(dòng)脈結(jié)扎后動(dòng)脈內(nèi)膜增生的差異分析及針對(duì)炎癥細(xì)胞、氧化應(yīng)激的干預(yù)研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 研究對(duì)象
            2.1.2 主要儀器和試劑
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 動(dòng)物分組
            2.2.2 小鼠頸動(dòng)脈結(jié)扎動(dòng)脈硬化模型的建立
            2.2.3 小鼠頸動(dòng)脈獲取及形態(tài)學(xué)測(cè)量
            2.2.4 H&E染色
            2.2.5 油紅O染色
            2.2.6 免疫組織化學(xué)分析
            2.2.7 ELISA檢測(cè)血脂
            2.2.8 血中性粒細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的流式細(xì)胞學(xué)分析
            2.2.9 ELISA法檢測(cè)炎癥介質(zhì)
            2.2.10 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 B6-Apoe-/-小鼠與C3H-Apoe-/-小鼠的空腹血脂水平
        3.2 在不干擾頸動(dòng)脈血流的情況下B6-Apoe-/-小鼠與C3H-Apoe-/-小鼠的頸動(dòng)脈動(dòng)脈硬化
        3.3 B6-Apoe-/-小鼠與C3H-Apoe-/-小鼠頸動(dòng)脈結(jié)扎后的頸動(dòng)脈硬化
        3.4 B6-Apoe-/-小鼠與C3H-Apoe-/-小鼠內(nèi)膜病變的細(xì)胞學(xué)分析
        3.5 外周血中性粒細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的流式細(xì)胞學(xué)分析
        3.6 抗中性粒細(xì)胞抗體干預(yù)實(shí)驗(yàn)
            3.6.1 抗Ly6G抗體治療后動(dòng)脈內(nèi)膜增生病變形態(tài)學(xué)測(cè)量
            3.6.2 抗Ly6G抗體治療后內(nèi)膜增生病變的細(xì)胞學(xué)分析
        3.7 干擾巨噬細(xì)胞分化抗體干預(yù)實(shí)驗(yàn)
            3.7.1 抗CSF-1R抗體治療實(shí)驗(yàn)動(dòng)脈內(nèi)膜增生病變形態(tài)學(xué)測(cè)量
            3.7.2 抗CSF-1R抗體治療實(shí)驗(yàn)動(dòng)脈內(nèi)膜增生病變的細(xì)胞學(xué)分析
        3.8 抗氧化劑NAC治療實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.8.1 NAC治療實(shí)驗(yàn)動(dòng)脈內(nèi)膜增生病變形態(tài)學(xué)測(cè)量
            3.8.2 NAC治療后內(nèi)膜病變的免疫組織化學(xué)分析
            3.8.3 NAC治療后小鼠血漿炎性因子測(cè)定
    4 討論
        4.1 遺傳背景、血流對(duì)兩個(gè)品系A(chǔ)poe-/-小鼠頸動(dòng)脈硬化的影響
        4.2 血脂與脂質(zhì)沉積對(duì)兩個(gè)品系A(chǔ)poe-/-小鼠頸動(dòng)脈硬化的影響
        4.3 炎癥細(xì)胞對(duì)頸動(dòng)脈結(jié)扎后頸動(dòng)脈內(nèi)膜增生的影響
        4.4 血管平滑肌細(xì)胞參與頸動(dòng)脈結(jié)扎后動(dòng)脈內(nèi)膜病變形成
        4.5 氧化應(yīng)激與頸動(dòng)脈內(nèi)膜增生
        4.6 血漿炎性細(xì)胞因子與頸動(dòng)脈內(nèi)膜增生
    5 結(jié)論
第二部分:N-乙酰半胱氨酸(NAC)通過調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激及炎癥反應(yīng)抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 研究對(duì)象
            2.1.2 主要儀器和試劑
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 ox-LDL刺激血管平滑肌細(xì)胞
            2.2.2 MTT法檢測(cè)血管平滑肌細(xì)胞的增殖能力
            2.2.3 劃痕試驗(yàn)檢測(cè)血管平滑肌細(xì)胞的遷移能力
            2.2.4 流式細(xì)胞學(xué)方法測(cè)量血管平滑肌ROS水平
            2.2.5 ELISA法檢測(cè)細(xì)胞上清液中的MCP-1、TNF-α及 IL-10 的含量
            2.2.6 分光光度法檢測(cè)血管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)液中的一氧化氮(NO)的含量
            2.2.7 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 NAC對(duì)血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響
        3.2 NAC對(duì)血管平滑肌細(xì)胞遷移能力的影響
        3.3 NAC對(duì)血管平滑肌細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響
        3.4 NAC對(duì)血管平滑肌細(xì)胞分泌的炎性因子(MCP-1、TNF-α、IL-10)的影響
        3.5 NAC對(duì)血管平滑肌細(xì)胞分泌一氧化氮(NO)的影響
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào):4049646

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