發(fā)布時間：2025-02-08 10:00

　　霍亂弧菌是霍亂的病原菌�；魜y可以引起爆發(fā)、流行、大流行，嚴重危害人民健康，甚至社會安定�；魜y在南亞地區(qū)流行了至少上千年。自1817年以來，霍亂發(fā)生過七次世界大流行。歷史上霍亂的七次大流行的病原菌，前6次是古典型霍亂弧菌，第七次是埃爾托型霍亂弧菌。1992年10月，一種被稱為O139型的新型霍亂弧菌首次襲擊印度大陸，引發(fā)了典型的霍亂爆發(fā)。一些專家指出，O139型霍亂弧菌很可能會引起第八次世界性霍亂大流行。 霍亂弧菌快速準確的檢測，對于自然流行的監(jiān)測與預防，具有重要意義。 20世紀90年代新出現(xiàn)和發(fā)展起來的基因芯片技術(shù)，是近年來在生命科學領域內(nèi)興起的一項高新技術(shù)。而用基因芯片檢測霍亂弧菌的方法，迄今為止，世界范圍內(nèi)均末見公開報道。 為了成功地研制一塊應用型的霍亂弧菌基因檢測芯片，以λ噬菌體全基因組DNA模擬病原體霍亂弧菌的一個靶區(qū)域，試驗性地對霍亂弧菌檢測芯片探針的制備方法、樣品的標記方法和芯片的雜交條件等進行了探索和優(yōu)化。通過多種方法的試驗和篩選，找到了一個簡便有效的電泳條帶的大規(guī)模批量回收轉(zhuǎn)移方法，即牙簽插膠法；在芯...

【文章頁數(shù)】：129 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1一2一8中可以看出，當探針濃度達到芯片打印的飽和濃度以上后，

博士學位論文6.用入噬菌體全基因組探針制備了一個含有396個樣品的DNA微陣列(圖1一2一8)。在該微陣列上，所有的探針都是按照其濃度由低到高的順序打印的。位于該陣列左上角的探針(第1行，第1一3列)濃度最低，為27u留mL;而位于左下角的探針(第36行，第31一33列)的濃度最....

圖2一1一1霍亂弧菌EIN16961株的PCR鑒定

617bp和一段47lbP的片段，但僅能擴增霍亂弧菌古典型tcPA蛋白基因中的一段617bp的片段;引物對g一h能特異性地擴增0139型外膜糖基轉(zhuǎn)移酶基因中的一段417bP的片段。從圖2一1一1可以看出，引物對m一，a一b，c一d和e一f分別準確地擴增出了588bP，302bp，....

圖2一1一3霍亂弧菌E1圖2一1一4霍亂弧菌EIN16961

N16961株的CTX基因元件的LAPCR結(jié)果鑒定圖2一1一4霍亂弧菌EIN16961株的VPI致病性島的主要區(qū)域的LAPCR結(jié)果鑒定用LA一PCR引物對CTX一U和CTX一L成功地擴增出了預先設計的CTX基因元件上的大小為7019bp的DNA片段(圖2一1一3)。通過用VPI致....

圖2一2一2霍亂弧菌DNA微陣列中CTX和VPI兩個亞陣列的分布和全部探針的排列(7)芯片打印之前，先將加好所有樣品(霍亂探針、陽性對照、陰性對照、、3;

50%DMSO)、邊角參照4個(131、140、311和320，50%DMSO);CTX與vPI兩個亞陣列之間以兩個空行間隔;每個樣品打印3個點，最終打印成3Ox32的陣列(圖2一2一2);圖2一2一2霍亂弧菌DNA微陣列中CTX和VPI兩個亞陣列的分布和全部探針的排列(7)芯片....

本文編號：4031357