發(fā)布時間：2025-07-03 04:28

　　 目的:探討2種磷酸鈣轉染法轉染293T細胞的效果,建立一種實現高效穩(wěn)定磷酸鈣轉染293T細胞的方法。方法:熒光顯微鏡觀察采用2種磷酸鈣轉染方法 (傳統(tǒng)磷酸鈣轉染法和改良磷酸鈣轉染法)轉染pCDHGFP-3xflag-TRAF6質粒進入293T細胞的轉染效率。采用Real-time PCR法和Western blotting法分別檢測2種磷酸鈣轉染方法轉染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6質粒進入293T細胞后,腫瘤壞死因子受體相關因子6(TRAF6)mRNA和flag蛋白表達水平。結果:熒光顯微鏡下觀察,與傳統(tǒng)磷酸鈣轉染法比較,改良磷酸鈣轉染法轉染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6質粒進入293T細胞24和48h后的轉染效率明顯升高(P<0.01);Real-time PCR法和Western blotting法檢測,與傳統(tǒng)轉染方法比較,磷酸鈣轉染改良法轉染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6質粒進入293T細胞24和48h后,TRAF6mRNA和flag蛋白表達水平均明顯升高(P<0.01)。結論:本研究建立的改良磷酸鈣轉染方法是一種高效、穩(wěn)定的DN...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 載體、細胞、主要試劑和儀器
    1.2 細胞培養(yǎng)
    1.3 質粒來源和轉染效率的計算
    1.4 傳統(tǒng)磷酸鈣轉染法轉染293T細胞
    1.5 改良磷酸鈣轉染法轉染293T細胞
    1.6 細胞轉染效率的檢測
    1.7 Real-time PCR法檢測293T細胞中腫瘤壞死因子受體相關因子6(TRAF6)mRNA表達水平
    1.8 Western blotting法檢測pCDH-GFP-3xflagTRAF6質粒轉染后293T細胞中flag蛋白表達水平
    1.9 統(tǒng)計學分析
2 結果
    2.1 熒光顯微鏡觀察2種轉染方法的轉染效率
    2.2 Real-time PCR法檢測pCDH-GFP-3xflagTRAF6質粒轉染后293T細胞中TRAF6 mRNA表達水平
    2.3 Western blotting法檢測pCDH-GFP-3xflagTRAF6質粒轉染后293T細胞中flag蛋白表達水平
3 討論



本文編號：4055770