MicroRNA-208b通過負(fù)調(diào)控ROR2抑制人骨肉細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的研究
發(fā)布時間：2020-12-08 19:40
目的骨肉瘤是一種好發(fā)于兒童和青少年,惡性程度甚高的原發(fā)性骨腫瘤。該腫瘤易在早期出現(xiàn)遠(yuǎn)處肺轉(zhuǎn)移,病死率較高,預(yù)后極差。探索骨肉瘤的具體發(fā)病機(jī)制以及新的診治策略是改善其預(yù)后的重要途徑。MicroRNAs（miRNAs）是一類真核生物內(nèi)源性非編碼微小RNA,與靶基因mRNA的3’非編碼區(qū)（3’ UTR）的“種子序列”配對結(jié)合,從而降解靶基因mRNA或抑制其翻譯。已有文獻(xiàn)報道,miRNAs表達(dá)失調(diào)在骨肉瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移等過程中具有重要作用,本研究旨在探討miR-208b在骨肉瘤組織和細(xì)胞系中的表達(dá)及其對骨肉瘤細(xì)胞系增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移能力的影響。方法首先利用實時熒光定量PCR（qRT-PCR）的方法分別檢測miR-208b在骨肉瘤組織、正常骨組織、人正常成骨細(xì)胞系NHOst和2種骨肉瘤細(xì)胞系（U20S和Saos-2）中的差異性表達(dá)情況,隨后建立穩(wěn)定表達(dá)miR-208b的骨肉瘤細(xì)胞系U2OS和Saos-2;分別通過CCK8實驗和克隆形成實驗檢測骨肉瘤細(xì)胞的增殖能力;流式細(xì)胞術(shù)檢測骨肉瘤細(xì)胞周期;裸鼠皮下成瘤實驗在體內(nèi)觀察骨肉瘤細(xì)胞形成移植瘤生長能力;劃痕愈合和Transwell侵襲實驗檢測...
【文章來源】：延邊大學(xué)吉林省 211工程院校
【文章頁數(shù)】：115 頁
【學(xué)位級別】：博士
【部分圖文】：
圖２．?２首閃熘ＵＺＵＳ、Ｓａｏｓ－２細(xì)胞甲］ａ：表：達(dá)ｍｉＫ－２Ｕ８ｂ的雙果檢測??
Ｓａｏｓ－２細(xì)胞的增殖能力的影響。在細(xì)胞克隆形成實驗中，轉(zhuǎn)染ｍｉＲ－２０８ｂ??ｍｉｍｉｃｓ或ｍｉｍｉｃｓ?ｃｏｎｔｒｏｌ后２４?ｈ進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)并將細(xì)胞接種于１２孔??板中，以＞５０個細(xì)胞的細(xì)胞集落為克隆形成的標(biāo)準(zhǔn)。如圖２．４所示，在??骨肉瘤Ｕ２０Ｓ細(xì)胞中，ｍｉＲ－２０８ｂ?ｍｉｍｉｃｓ組和ｍｉｍｉｃｓ?ｃｏｎｔｒｏｌ組細(xì)胞克??隆數(shù)分別為２６±３．０，５８土４．０，升高ｍｉＲ－２０８ｂ的表達(dá)可顯著抑制Ｕ２０Ｓ??細(xì)胞的克隆形成能力，兩組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｋ０．?０５）。在骨肉瘤??Ｓａｏｓ－２細(xì)胞中，ｍｉＲ－２０８ｂ?ｍｉｍｉｃｓ組和ｍｉｍｉｃｓ?ｃｏｎｔｒｏｌ組細(xì)胞克隆數(shù)分??別為２７±３．０，５６±５．０，升高ｍｉＲ－２０８ｂ的表達(dá)可顯著抑制Ｓａｏｓ－２細(xì)胞??的克隆形成能力，兩組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｋ０．０５）。這些實驗結(jié)果??表明，過表達(dá)ｍｉＲ－２０８ｂ可抑制骨肉瘤細(xì)胞的克隆形成能力。??ｍｉｍｉｃｓ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｍｉＲ－２（）８ｂ?ｍｉｍｉｃｓ??－??－??ｍｉｍｉｃｓ?ｃｏｎｔｒｏｌ??８０?－ｉ?Ｅｓａ?ｍｉＲ－２０８ｂ?ｍｉｍｉｃｓ??
±１．８８）?％，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（均戶〈０．０５）。同樣在骨肉瘤Ｓａｏｓ－２??細(xì)胞中有一致的實驗結(jié)果。??如圖２．６所示，在骨肉瘤Ｕ２０Ｓ細(xì)胞中，與對照組相比，過表達(dá)??ｍｉＲ－２０８ｂ后Ｃｙｃｌｉｎ?Ｅ和Ｃｙｃｌｉｎ?Ｄ１的相對表達(dá)量均明顯減少??（０．２８±０．０４，０．４２土０．０５），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（均Ｋ０．?０１）。同樣??在骨肉瘤Ｓａｏｓ－２細(xì)胞中，過表達(dá)ｍｉＲ－２０８ｂ后Ｃｙｃｌｉｎ?Ｅ和Ｃｙｃｌｉｎ?Ｄ１??的相對表達(dá)量均明顯減少（０．?３１±０．０３，?０．?３９±０．０４），差異具有統(tǒng)計學(xué)??意義（均Ｋ０．?０１）而兩種細(xì)胞中ＣＤＫ４的表達(dá)量均無明顯變化（均乃０．?０５）。??２３??
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Exploration of the regulatory effect of miR-21 on breast cancer cell line proliferation and invasion as well as the downstream target genes[J]. Ying Kuang,Ying-Jie Nie. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2016(05)
[2]miR-181b通過靶向調(diào)控N-myc下游調(diào)節(jié)基因2影響骨肉瘤細(xì)胞的遷移和侵襲[J]. 邵建立,李志忠,王亮,焦根龍,周志剛,孫國棟. 南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2016(03)
本文編號：2905582
【文章來源】：延邊大學(xué)吉林省 211工程院校
【文章頁數(shù)】：115 頁
【學(xué)位級別】：博士
【部分圖文】：
圖２．?２首閃熘ＵＺＵＳ、Ｓａｏｓ－２細(xì)胞甲］ａ：表：達(dá)ｍｉＫ－２Ｕ８ｂ的雙果檢測??
Ｓａｏｓ－２細(xì)胞的增殖能力的影響。在細(xì)胞克隆形成實驗中，轉(zhuǎn)染ｍｉＲ－２０８ｂ??ｍｉｍｉｃｓ或ｍｉｍｉｃｓ?ｃｏｎｔｒｏｌ后２４?ｈ進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)并將細(xì)胞接種于１２孔??板中，以＞５０個細(xì)胞的細(xì)胞集落為克隆形成的標(biāo)準(zhǔn)。如圖２．４所示，在??骨肉瘤Ｕ２０Ｓ細(xì)胞中，ｍｉＲ－２０８ｂ?ｍｉｍｉｃｓ組和ｍｉｍｉｃｓ?ｃｏｎｔｒｏｌ組細(xì)胞克??隆數(shù)分別為２６±３．０，５８土４．０，升高ｍｉＲ－２０８ｂ的表達(dá)可顯著抑制Ｕ２０Ｓ??細(xì)胞的克隆形成能力，兩組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｋ０．?０５）。在骨肉瘤??Ｓａｏｓ－２細(xì)胞中，ｍｉＲ－２０８ｂ?ｍｉｍｉｃｓ組和ｍｉｍｉｃｓ?ｃｏｎｔｒｏｌ組細(xì)胞克隆數(shù)分??別為２７±３．０，５６±５．０，升高ｍｉＲ－２０８ｂ的表達(dá)可顯著抑制Ｓａｏｓ－２細(xì)胞??的克隆形成能力，兩組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｋ０．０５）。這些實驗結(jié)果??表明，過表達(dá)ｍｉＲ－２０８ｂ可抑制骨肉瘤細(xì)胞的克隆形成能力。??ｍｉｍｉｃｓ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｍｉＲ－２（）８ｂ?ｍｉｍｉｃｓ??－??－??ｍｉｍｉｃｓ?ｃｏｎｔｒｏｌ??８０?－ｉ?Ｅｓａ?ｍｉＲ－２０８ｂ?ｍｉｍｉｃｓ??
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【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Exploration of the regulatory effect of miR-21 on breast cancer cell line proliferation and invasion as well as the downstream target genes[J]. Ying Kuang,Ying-Jie Nie. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2016(05)
[2]miR-181b通過靶向調(diào)控N-myc下游調(diào)節(jié)基因2影響骨肉瘤細(xì)胞的遷移和侵襲[J]. 邵建立,李志忠,王亮,焦根龍,周志剛,孫國棟. 南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2016(03)
本文編號：2905582
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