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骨肉瘤中LRP1-SNRNP25融合基因促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲遷移的分子機(jī)制

發(fā)布時(shí)間:2025-05-20 04:50
  目的本研究旨在圍繞前期研究中發(fā)現(xiàn)的存在于骨肉瘤的特異性新頻發(fā)LRP1-SNRNP25融合基因,首先發(fā)現(xiàn)該融合基因在DNA水平上的結(jié)構(gòu)和斷裂位點(diǎn),明確其形成機(jī)制,然后探討LRP1-SNRNP25融合基因?qū)侨饬黾?xì)胞的侵襲、遷移以及成瘤和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移能力的影響,之后尋找LRP1-SNRNP25融合基因下游的信號(hào)分子通路,明確LRP1-SNRNP25融合基因在骨肉瘤中發(fā)揮促侵襲和遷移作用的分子機(jī)制,為針對(duì)LRP1-SNRNP25融合基因的靶向治療奠定基礎(chǔ),探索骨肉瘤中LRP1-SNRNP25靶向治療新靶點(diǎn)。方法1.HiSeq X Ten平臺(tái)對(duì)LRP1-SNRNP25融合基因陽性標(biāo)本進(jìn)行全基因組測(cè)序。針對(duì)已經(jīng)檢測(cè)到的LRP1-SNRNP25融合基因陽性的1例骨肉瘤樣本,提取基因組DNA,采用HiSeq X Ten平臺(tái)進(jìn)行全基因組測(cè)序(WGS),結(jié)合生物信息學(xué)分析技術(shù),明確LRP1-SNRNP25融合基因在DNA水平上的結(jié)構(gòu),并驗(yàn)證該融合基因的存在。2.探討LRP1-SNRNP25融合基因過表達(dá)對(duì)骨肉瘤細(xì)胞的侵襲、遷移以及成瘤和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移能力影響。一方面,構(gòu)建LRP1-SNRNP25質(zhì)粒,購(gòu)買LRP1和...

【文章頁數(shù)】:126 頁

【學(xué)位級(jí)別】:博士

【文章目錄】:
中文摘要
Abstract
縮略語/符號(hào)說明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、LRP1-SNRNP25 融合基因的發(fā)生機(jī)制、結(jié)構(gòu)及其斷裂位點(diǎn)
    1.1 對(duì)象和方法
        1.1.1 1例LRP1-SNRNP25 融合基因陽性的骨肉瘤組織標(biāo)本
        1.1.2 主要試劑
        1.1.3 主要儀器
        1.1.4 主要的試劑配方
        1.1.5 實(shí)驗(yàn)方法
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)證明樣本中DNA的完整性
        1.2.2 Hi SeqXTen全基因組測(cè)序在DNA水平上驗(yàn)證了LRP1-SNRNP25 的存在及其結(jié)構(gòu)
    1.3 討論
    1.4 小結(jié)
二、構(gòu)建LRP1-SNRNP25、LRP1、SNRNP25 穩(wěn)定表達(dá)的骨肉瘤細(xì)胞系
    2.1 對(duì)象和方法
        2.1.1 細(xì)胞系和質(zhì)粒
        2.1.2 主要試劑和耗材
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)用試劑的配制
        2.1.5 實(shí)驗(yàn)方法
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 LRP1-SNRNP25 過表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建與鑒定
        2.2.2 Westernblot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后骨肉瘤細(xì)胞143B和 SAOS2中LRP1、SNRNP25、LRP1-SNRNP25 的蛋白表達(dá)水平
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
三、LRP1-SNRNP25 融合基因?qū)侨饬黾?xì)胞侵襲和遷移的影響
    3.1 對(duì)象和方法
        3.1.1 穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器
        3.1.4 主要試劑配方
        3.1.5 實(shí)驗(yàn)方法
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 LRP1-SNRNP25 融合基因?qū)侨饬黾?xì)胞遷移、侵襲能力的影響
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
四、LRP1-SNRNP25 融合基因促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力的分子機(jī)制研究
    4.1 對(duì)象和方法
        4.1.1 細(xì)胞系
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要儀器設(shè)備
        4.1.4 主要試劑的配制
        4.1.5 實(shí)驗(yàn)方法
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 LRP1-SNRNP25融合基因上調(diào)p JNK和 MMP2 的表達(dá)水平
        4.2.2 在骨肉瘤細(xì)胞中LRP1-SNRNP25 融合蛋白與37LRP相互結(jié)合
        4.2.3 在骨肉瘤細(xì)胞中LRP1-SNRNP25 融合蛋白與p JNK、37LRP蛋白共定位
        4.2.4 LRP1-SNRNP25 融合蛋白與p JNK、37LRP蛋白相互作用
        4.2.5 針對(duì)37LRP的小干擾RNA降低LRP1-SNRNP25 上調(diào)的MMP2 表達(dá)水平
        4.2.6 pJNK抑制劑SP600125 抑制LRP1-SNRNP25 上調(diào)的37LRP/MMP2表達(dá)水平
        4.2.7 p JNK抑制劑SP600125 抑制LRP1-SNRNP25 增強(qiáng)的骨肉瘤細(xì)胞的侵襲和遷移作用
        4.2.8 針對(duì)37LRP的小干擾RNA抑制LRP1-SNRNP25 增強(qiáng)的骨肉瘤細(xì)胞的侵襲和遷移作用
        4.2.9 MMPs抑制劑Marimastat抑制LRP1-SNRNP25 增強(qiáng)的骨肉瘤細(xì)胞的侵襲和遷移作用
    4.3 討論
    4.4 小結(jié)
五、在小鼠體內(nèi)LRP1-SNRNP25 融合基因?qū)υ鲋澈娃D(zhuǎn)移的影響
    5.1 對(duì)象和方法
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象
        5.1.2 主要試劑
        5.1.3 主要試劑配方
        5.1.4 實(shí)驗(yàn)方法
    5.2 結(jié)果
        5.2.1 在小鼠皮下骨肉瘤模型中LRP1-SNRNP25 融合基因促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)
        5.2.2 免疫組化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)LRP1-SNRNP25 高表達(dá)143B細(xì)胞和空載143B細(xì)胞種植的小鼠皮下骨肉瘤模型的瘤塊中LRP1-SNRNP25,p-JNK,MMP2,ki67 的表達(dá)情況
        5.2.3 SP600125 可以抑制LRP1-SNRNP25 高表達(dá)143B細(xì)胞種植的小鼠皮下骨肉瘤模型的腫瘤生長(zhǎng)
        5.2.4 在小鼠尾靜脈轉(zhuǎn)移模型中LRP1-SNRNP25 促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移
    5.3 討論
    5.4 小結(jié)
全文結(jié)論
論文創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述 低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白 1 在腫瘤中的作用研究
    參考文獻(xiàn)
附件
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào):4046876

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