發(fā)布時間：2020-11-09 18:13

　　 背景:慢性咽炎(chronic pharyngitis)為咽部粘膜、粘膜下及淋巴組織的慢性炎癥,其病程長,癥狀頑固,較難治愈。近些年來,空氣污染的加重使慢性咽炎的發(fā)病逐年增多,同時感染后亂用抗生素又使慢性咽炎的癥狀加重,遷延不愈。一般認為慢性咽炎的發(fā)生多與致病菌感染相關,近來研究表明咽部菌群失調與慢性咽炎的關系更為密切。所以,合理使用抗生素及微生態(tài)調節(jié)劑,調節(jié)咽部菌群平衡,對于慢性咽炎的預防和治療具有重要的意義。進行咽部菌群的調節(jié),首先要解析慢性咽炎咽部菌群的變化特征。DGGE和二代測序等新的技術和方法對咽部菌群特征的系統(tǒng)分析奠定了基礎。解析慢性咽炎患者咽部菌群特征為慢性咽炎的有效防治打開了新思路。目的:分析患者和正常人的咽部菌群結構,探索慢性咽炎患者咽部菌群分布的多樣性變化,找出慢性咽炎患者與正常人咽部差異菌群,為指導臨床對該病進行菌群調節(jié)及針對性的治療奠定基礎。方法:1.選取15例臨床診斷為單純慢性咽炎患者為研究組,并選取15例正常健康人(非慢性咽炎)作為對照組。2.取兩組患者的外周靜脈血,測其白細胞總數(shù)及其各項血細胞的數(shù)量,并比對兩組人群間各項指標的差異。3.分別用無菌咽拭子取口咽部分泌物,對取到的咽部分泌物提取DNA并將其進行聚合酶鏈反應擴增后聯(lián)合變性梯度凝膠電泳(PCR-DGGE)的方法進行菌群多樣性的分析。對于DGGE電泳結果進行比對后,將兩組有差異性的條帶進行切膠測序,測序結果在GenBank數(shù)據(jù)庫中進行Blast對比分析,最終可獲得兩組部分差異性的菌群種屬。4.用鏈球菌屬、不動桿菌屬、金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌四種菌屬(或菌種)的特定引物做驗證性PCR,以鑒定兩組人群咽部中是否含有這四種菌及其含量的差異。結果:1.與正常人相比,慢性咽炎患者外周血中白細胞總數(shù)和中性粒細胞數(shù)量顯著增高(p0.05)。2.慢性咽炎患者的咽部菌群種數(shù)比正常人顯著增多(p0.01)。3.兩組人群具有差異性的菌屬的測序結果:慢性咽炎患者咽部明顯差異的菌屬為兼性雙球菌屬(Gemella)、韋榮球菌屬(Veillonella)、普雷沃菌屬(Prevotella);正常人明顯差異性菌屬為奈瑟菌屬(Neisseria);兩種人群均明顯存在的菌屬中,慢性咽炎患者相對較少的菌屬為假單胞菌屬(Pseudomonas),而慢性咽炎患者相對較多的菌屬為鏈球菌屬(Streptococcus)。4.PCR結果表明,慢性咽炎患者與正常人咽部鏈球菌屬檢出率均為100%,且慢性咽炎患者咽部鏈球菌屬含量高于正常人(p0.05);不動桿菌、金黃色葡萄球菌在患者咽部的檢出率略高于正常人;表皮葡萄球菌在兩組人群咽部均未檢出。結論:1.慢性咽炎患者的咽部粘膜環(huán)境存在有炎癥反應。2.慢性咽炎患者咽部菌群多樣性比正常人增高,并出現(xiàn)菌群失調。3.慢性咽炎咽部的菌群失調主要以兼性雙球菌屬、韋榮球菌屬、普雷沃菌屬、鏈球菌屬、金黃色葡萄球菌、不動桿菌屬的增多和奈瑟菌屬、假單胞菌屬的減少為主要特征。
【學位單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2015
【中圖分類】：R766.14
【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
前言
材料與方法
    1. 材料
        1.1 臨床資料
        1.2 樣本類型
        1.3 試劑
        1.4 儀器
        1.5 分析軟件
    2. 方法
        2.1 標本采集
        2.2 樣本中總DNA的提取
        2.3 PCR擴增
        2.4 DGGE分析
        2.5 切膠測序
        2.6 測序后特異性菌屬的驗證
結果
    1 慢性咽炎患者與健康人外周靜脈血的白細胞及其種類數(shù)量和差別
    2 慢性咽炎患者與健康人的咽部菌群差異性分析
        2.1 DGGE圖譜分析
        2.2 聚類分析
        2.3 主成分（PCA）分析
        2.4 差異性菌群分析（測序分析）
    3 特異性菌屬的鑒定
        3.1 鏈球菌屬的PCR鑒定
        3.2 不動桿菌屬的PCR鑒定
        3.3 表皮葡萄球菌PCR鑒定
        3.4 金黃色葡萄球菌的PCR鑒定
討論
結論
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝

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本文編號：2876799