發(fā)布時間：2020-12-08 18:46

　　第一部分目的:血小板功能檢測包括血小板聚集試驗及其他血小板激活及功能的評估。其中,全血流式細胞術(shù)具有樣本需求量小,采用全血樣本接近體內(nèi)激活狀態(tài),不受血小板計數(shù)影響等優(yōu)點。P-選擇素作為一種特異性血小板表面標(biāo)志物,介導(dǎo)血小板與包括單核細胞、中性粒細胞在內(nèi)的白細胞聚集發(fā)揮炎癥誘導(dǎo)作用。本研究擬從采樣、激活、流式細胞術(shù)檢測等方面探討血小板表面P-選擇素的檢測方法,并進一步探索血小板表面P-選擇素是否能成為一種較好的反應(yīng)抗血小板治療的指標(biāo)。方法:使用21號直針從健康受試者外周靜脈穿刺,采集2.7mL血樣于枸櫞酸鈉抗凝劑的采血管。在前處理中采取控制變量法,采用不同的全血稀釋倍數(shù),多種激動劑種類及濃度梯度,設(shè)定不同流式細胞學(xué)檢測參數(shù)比較血小板表面的P-選擇素表達情況。結(jié)果:1.采血后將樣本稀釋10倍可減少血小板聚集;2.P-選擇素表達與ADP劑量呈較好的正相關(guān)性,ADP濃度達到20μM可見P-選擇素表達到達峰值。3.鞘液流速對檢測結(jié)果存在影響。4.隨貯存時間增加,血小板表面P-選擇素的表達量明顯增加。結(jié)論:在采血后應(yīng)即刻前處理,進行適當(dāng)?shù)臉悠废♂?以ADP（終濃度20μM）激活處理,并以采用較低的... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖２?１０倍稀釋的全血樣本無拖帶效應(yīng)??

流式細胞儀采樣參數(shù)探索??表６不同流式細胞儀采集速度的Ｐ－選擇素表達??編號?１２３ＡＤＰ?終濃度?０?ｌ〇ＨＭ?２０＾Ｍ?ｌｏｗ－ＭＦＩ?１．３７?１．９２?２．２０ｍｅｄｉｕｍ－ＭＦＩ?２．１４?２．７２?３．００論何種ＡＤＰ濃度激活，相比于低流速，以中速進行流式細胞學(xué)收板表面Ｐ－選擇素的ＭＦＩ均有增加。在低或中流速收集的樣本中，Ｐ－在ＡＤＰ＝２０卩Ｍ基本可達最大表達量。??？?ｌｏｗ－ＭＦＩ?．ｍｅｄｉｕｍ－ＭＦＩ??

圖４不同樣本貯存時間的Ｐ－選擇素表達??隨貯存時間増加，血小板表面Ｐ－選擇素的表達量明顯増加（陽性百分比或平均??光強度）。加入ＡＤＰ激動后的Ｐ－選擇素表達較激動前仍有增加。同時貯存超過２４??時的樣本（Ｓ１－Ｓ４）中部分出現(xiàn)溶血現(xiàn)象（結(jié)果未顯示）。、??析及討論??血小板的流式細胞學(xué)檢測，不同于紅細胞、淋巴細胞，主要體現(xiàn)在以下方面。??一，血小板計數(shù)的正常值為ｌ〇〇－３５〇ｘｌ〇９／Ｌ，全血樣本中血小板濃度較髙；其二，??血小板生物學(xué)活性較脆弱，從采樣至上機檢測過程中受各種因素影響，包括①不同??類型／濃度的血小板激動劑；②不恰當(dāng)激活：止血帶、穿刺損傷、劇烈振蕩、離心、??滌；③時間：采樣至前處理時間，前處理至流式細胞學(xué)時間；其三，血小板體積??小，門控策略除了采用ＦＳ／ＳＳ，應(yīng)至少采用一種特異的血小板標(biāo)記性抗體，如ＣＤ６１、??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]四氫小檗堿對血小板聚集和血栓形成的抑制作用(英文)[J]. 宣波,王偉,李德興.  Acta Pharmacologica Sinica. 1994(02)



本文編號：2905513