發(fā)布時(shí)間：2025-06-04 00:41

　　目的:急性心肌梗死（Acute myocardial infarction,AMI）是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟�。–oronary heart disease,CHD）中最危急和最嚴(yán)重的類(lèi)型,臨床治療指南推薦盡快開(kāi)通閉塞血管使冠狀動(dòng)脈恢復(fù)血流為最佳治療手段。然而,當(dāng)血管開(kāi)通使心肌得到再灌注時(shí),有些患者卻出現(xiàn)心律失常、血管無(wú)復(fù)流、心肌壞死范圍擴(kuò)大等心肌缺血再灌注損傷（Myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI）的現(xiàn)象,隨著再灌注手段的發(fā)展與應(yīng)用,再灌注損傷的現(xiàn)象越來(lái)越得到重視。再灌注損傷的發(fā)生機(jī)制十分復(fù)雜,再灌注過(guò)程中一些因素激活細(xì)胞凋亡、壞死等多條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,最終導(dǎo)致心肌的損傷、壞死。隨著對(duì)基因研究的深入以及生物信息學(xué)的發(fā)展,長(zhǎng)鏈非編碼RNA（Long non-coding RNAs,LncRNAs）被發(fā)現(xiàn)可以直接或間接調(diào)控編碼蛋白基因或蛋白,成為近幾年心肌缺血再灌注損傷機(jī)制及防治的研究熱點(diǎn)。尋找參與調(diào)控的LncRNA并深入研究調(diào)控機(jī)制成為防治心肌缺血再灌注損傷的一個(gè)新的切入點(diǎn)。LncRNA GAS5（growth arrest specifi...

【文章頁(yè)數(shù)】：93 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語(yǔ)
第一部分:LncRNA GAS5 在大鼠心肌缺血再灌注損傷中的表達(dá)及作用研究
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
            2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            2.1.3 主要儀器設(shè)備
            2.1.4 主要試劑
            2.1.5 引物序列
            2.1.6 siRNA序列
        2.2 方法
            2.2.1 相關(guān)溶液的配制
            2.2.2 動(dòng)物離體心肌缺血再灌注損傷模型的建立
            2.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組
            2.2.4 H9c2心肌細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.5 心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧模型的建立
            2.2.6 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.2.7 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分組
            2.2.8 CCK-8細(xì)胞活性檢測(cè)
            2.2.9 LDH活性測(cè)定
            2.2.10 CK-MB活性測(cè)定
            2.2.11 GSH活性測(cè)定
            2.2.12 Hoechst染色
            2.2.13 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡情況
            2.2.14 Western blot分析
            2.2.15 總RNA提取
            2.2.16 提純RNA及定量
            2.2.17 逆轉(zhuǎn)錄
            2.2.18 Real-time PCR
            2.2.19 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 GAS5 在大鼠IR心肌組織和HR心肌細(xì)胞中上調(diào)表達(dá)
        3.2 GAS5對(duì)缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)的H9C2心肌細(xì)胞損傷的影響
            3.2.1 沉默GAS5表達(dá)對(duì)缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞損傷的影響
            3.2.2 沉默GAS5表達(dá)對(duì)缺氧復(fù)氧誘導(dǎo)的H9C2心肌細(xì)胞凋亡的影響
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分:LncRNA GAS5在H9c2 缺氧復(fù)氧損傷中通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合miR-532 調(diào)控PI3K/AKT通路
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 材料
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
            2.1.2 主要儀器設(shè)備
            2.1.3 主要試劑
            2.1.4 引物序列
            2.1.5 miRNA mimic/inhibitor序列
        2.2 方法
            2.2.1 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.2.2 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分組
            2.2.3 CCK-8細(xì)胞活力檢測(cè)
            2.2.4 LDH活性測(cè)定
            2.2.5 GSH活性測(cè)定
            2.2.6 CK-MB活性測(cè)定
            2.2.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡情況
            2.2.8 Realtime PCR
            2.2.9 Western blot分析
            2.2.10 生物信息分析
            2.2.11 熒光素酶報(bào)告基因
            2.2.12 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 預(yù)測(cè)GAS5 的下游靶基因及ceRNA調(diào)控網(wǎng)絡(luò)
        3.2 GAS5、miR-532-5p、PTEN在 H9c2 缺氧復(fù)氧損傷的表達(dá)及相互作用關(guān)系
        3.3 熒光素酶實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證GAS5與miR-532-5p、miR-532-5p與PTEN結(jié)合位點(diǎn)
        3.4 miR-532-5p對(duì)心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷的影響
        3.5 GAS5、miR-532-5p可調(diào)控PTEN的蛋白表達(dá)
        3.6 GAS5 作為ceRNA結(jié)合miR-532-5p在 HR損傷中調(diào)控PI3K/AKT通路
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述 長(zhǎng)鏈非編碼RNA在缺血性心臟病中調(diào)控的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：4049058