發(fā)布時(shí)間：2020-11-01 19:06

　　 乳腺癌是女性中常見(jiàn)的惡性腫瘤,其發(fā)病率逐年上升,且呈現(xiàn)出年輕化趨勢(shì),嚴(yán)重危害著女性的健康。目前,藥物療法(化療)仍是乳腺癌的主要治療方法,但化療藥物在治療時(shí)會(huì)降低患者的血小板含量。因此,尋找一種既抑制乳腺癌生長(zhǎng)又不影響血小板水平的藥物至關(guān)重要。研究發(fā)現(xiàn)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移依賴于新生血管為其提供氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),通過(guò)抑制腫瘤的血管生成是治療腫瘤的有效策略。同時(shí)在腫瘤微環(huán)境中,大量存在的巨噬細(xì)胞能釋放多種促血管生成因子,進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的血管生成,故可尋找通過(guò)巨噬細(xì)胞抑制血管生成的藥物。艾曲波帕(Eltrombopag,ELB)是一種促血小板生成素受體激動(dòng)劑,用于慢性免疫性血小板減少癥的治療。研究證明ELB具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用,但其抑制腫瘤生長(zhǎng)及潛在的作用機(jī)制尚不明確。故本課題探討ELB是否能夠通過(guò)抑制血管生成進(jìn)而抑制腫瘤的生長(zhǎng),且能維持血小板的水平。具體研究?jī)?nèi)容如下:1、ELB對(duì)乳腺癌細(xì)胞系4T1增殖及血管生成相關(guān)因子的抑制作用。首先通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ELB對(duì)不同腫瘤細(xì)胞的抑制作用,發(fā)現(xiàn)ELB對(duì)4T1細(xì)胞的抑制作用最顯著。其次通過(guò)q-PCR方法檢測(cè)ELB對(duì)4T1細(xì)胞血管生成相關(guān)因子mRNA的表達(dá),來(lái)進(jìn)一步探討ELB是否抑制腫瘤細(xì)胞的血管生成,結(jié)果顯示:ELB能夠抑制4T1細(xì)胞血管生成相關(guān)因子(VEGF-A、bFGF、MMP-9)mRNA的表達(dá),且在20μM時(shí)抑制作用最顯著。2、ELB通過(guò)巨噬細(xì)胞(Raw264.7)介導(dǎo)的體外抗血管生成作用研究。通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)、q-PCR方法和ELISA檢測(cè)ELB對(duì)Raw264.7細(xì)胞增殖、血管生成相關(guān)因子mRNA的表達(dá)及VEGF蛋白釋放的影響。結(jié)果顯示:ELB抑制Raw264.7細(xì)胞的增殖呈劑量依賴性,抑制Raw264.7細(xì)胞血管生成相關(guān)因子(VEGF-A、bFGF、MMP-9)mRNA的表達(dá)和VEGF蛋白的釋放。為了進(jìn)一步探討ELB通過(guò)巨噬細(xì)胞對(duì)下游血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)功能的影響,將ELB(10μM)作用于巨噬細(xì)胞24 h后制備巨噬細(xì)胞上清液,然后作用于HUVEC,通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、成管實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其對(duì)HUVEC功能的影響,同時(shí)檢測(cè)ELB直接作用對(duì)HUVEC功能的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn):ELB作用于巨噬細(xì)胞24 h后的上清顯著抑制HUVEC的增殖、遷移和小管形成,但ELB直接作用HUVEC不影響其增殖、遷移和小管形成。表明ELB可通過(guò)巨噬細(xì)胞介導(dǎo)抑制血管生成。3、ELB體內(nèi)抑制腫瘤生長(zhǎng)。構(gòu)建4T1乳腺癌模型,將小鼠分為陰性對(duì)照組(生理鹽水)、ELB低劑量組(75 mg/kg)、ELB中劑量組(150 mg/kg)、ELB高劑量組(185 mg/kg)和陽(yáng)性對(duì)照組(吉西他濱75 mg/kg),考察給藥后小鼠的腫瘤體積、瘤重、抑瘤率、體重和血小板的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn):不同劑量的ELB均能抑制腫瘤的生長(zhǎng),且ELB高劑量組(185 mg/kg)對(duì)腫瘤的抑制作用比吉西他濱組(75 mg/kg)更顯著;ELB各劑量組均能將小鼠血小板維持在正常水平,而吉西他濱組(75 mg/kg)使血小板降低。說(shuō)明ELB在體內(nèi)能抑制腫瘤生長(zhǎng),并且產(chǎn)生的毒副作用低于吉西他濱。4、ELB對(duì)小鼠體內(nèi)腫瘤血管生成相關(guān)因素的研究。通過(guò)免疫熒光染色觀察ELB對(duì)腫瘤的血管形成、VEGF蛋白的釋放、巨噬細(xì)胞的募集作用,q-PCR方法檢測(cè)腫瘤中VEGF-A mRNA的表達(dá)情況。結(jié)果顯示:ELB能夠顯著抑制腫瘤的血管生成,同時(shí)能抑制腫瘤中巨噬細(xì)胞的募集、抑制VEGF蛋白的釋放及降低VEGF-A mRNA的表達(dá)。表明ELB能夠通過(guò)抑制腫瘤中血管生成來(lái)抑制腫瘤生長(zhǎng)。本研究結(jié)果表明:ELB在體內(nèi)外均能抑制乳腺癌的生長(zhǎng),且不影響血小板的水平,其作用機(jī)制可能是通過(guò)抑制血管生成相關(guān)因子的表達(dá)。
【學(xué)位單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：R96
【部分圖文】：

第一部分：ELB 體外抗腫瘤活性的研究。首先通過(guò) MTT 實(shí)驗(yàn)檢測(cè) ELB 對(duì)不同腫瘤細(xì)胞增殖的影響，發(fā)現(xiàn) ELB 對(duì) 4T1 乳腺癌細(xì)胞的抑制作用最顯著。進(jìn)一步通過(guò) q-PCR 方法檢測(cè) ELB 對(duì) 4T1 乳腺癌細(xì)胞血管生成相關(guān)因子（VEGF-A、bFGF、MMP-9）mRNA 的表達(dá)。第二部分：ELB 體外介導(dǎo)巨噬細(xì)胞抗血管生成作用的研究。首先通過(guò) MTT實(shí)驗(yàn)、q-PCR 和 ELISA 檢測(cè) ELB 對(duì)巨噬細(xì)胞增殖、血管生成相關(guān)因子（VEGF-A、bFGF、MMP-9）mRNA 的表達(dá)及 VEGF 蛋白的影響；再通過(guò) MTT 實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、Matrigel 基質(zhì)膠細(xì)胞成管實(shí)驗(yàn)，觀察 ELB 通過(guò)巨噬細(xì)胞對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和管腔形成的影響。第三部分：ELB 體內(nèi)抗腫瘤活性的研究。構(gòu)建 4T1 荷瘤小鼠模型，分組給予不同劑量的 ELB 后，考察不同組小鼠的腫瘤體積變化、瘤重、抑瘤率及小鼠體重變化，研究 ELB 對(duì)腫瘤的抑制作用。然后通過(guò)免疫熒光染色觀察 ELB 對(duì)腫瘤的血管形成、巨噬細(xì)胞募集作用、VEGF 蛋白的表達(dá)，q-PCR 方法檢測(cè)腫瘤中VEGF-A mRNA 水平，血常規(guī)測(cè)血小板的含量。本課題的研究思路如圖 1.1 所示。

圖 2.1 ELB 作用于不同腫瘤細(xì)胞 48h 后的細(xì)胞增殖。（A）LLC 細(xì)胞。（B）4T1 細(xì)胞。（C）SMMC-7721 細(xì)胞。（D）A549 細(xì)胞。（E）H1299 細(xì)胞。2.3.2 ELB 抑制 4T1 細(xì)胞血管生成相關(guān)因子 mRNA 的表達(dá)腫瘤的生長(zhǎng)需要血管為其提供氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)[75]。為了探討 ELB 對(duì) 4T1 細(xì)胞內(nèi)血管生成因子 mRNA 表達(dá)的影響，將不同濃度的 ELB（5 μM、10 μM、20 μM）作用 4T1 細(xì)胞 3 h 后提取總 RNA，用 q-PCR 方法檢測(cè) 4T1 細(xì)胞內(nèi)血管生成相關(guān)因子（VEGF-A、bFGF、MMP-9）mRNA 的表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖 2.2 所示，與 Control 組相比，ELB 以劑量依賴性抑制細(xì)胞內(nèi) VEGF-AmRNA、bFGF mRNA的表達(dá)，各組與 Control 組相比均有顯著性差異，且在 20 μM 時(shí)抑制作用最顯著（圖 2.2 A 和圖 2.2 B）；ELB 也呈劑量依賴性抑制細(xì)胞內(nèi) MMP-9 mRNA 的表達(dá)，但只有在 20 μM 時(shí)有顯著性差異（圖 2.2 C）。以上結(jié)果表明 ELB 能抑制4T1 細(xì)胞內(nèi) VEGF-A、bFGF、MMP-9 mRNA 的表達(dá)。A BC

不同腫瘤細(xì)胞 48h 后的細(xì)胞增殖。（A）LLC MMC-7721 細(xì)胞。（D）A549 細(xì)胞。（E）H1 4T1 細(xì)胞血管生成相關(guān)因子 mRNA 的要血管為其提供氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)[75]。為了 mRNA 表達(dá)的影響，將不同濃度的 ELB（ 后提取總 RNA，用 q-PCR 方法檢測(cè) 4T1bFGF、MMP-9）mRNA 的表達(dá)水平。實(shí)，ELB 以劑量依賴性抑制細(xì)胞內(nèi) VEGF-Aontrol 組相比均有顯著性差異，且在 20 μ.2 B）；ELB 也呈劑量依賴性抑制細(xì)胞內(nèi)μM 時(shí)有顯著性差異（圖 2.2 C）。以上-A、bFGF、MMP-9 mRNA 的表達(dá)。BC
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 李麗英;;套入式血管生成的研究進(jìn)展[J];四川生理科學(xué)雜志;2011年01期

2 朱兆恩 ,郭凱霞 ,張子英;抗血管生成中藥研究進(jìn)展[J];人民軍醫(yī);2005年05期

3 王淑美,徐曉玉,張文亮;調(diào)控血管生成中藥的研究現(xiàn)狀[J];時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥;2004年09期

4 王國(guó)慶,易成,周宏遠(yuǎn);因特網(wǎng)上的血管生成研究資源[J];中國(guó)微循環(huán);2004年04期

5 練燕;抑制血管生成:第五類(lèi)抗癌療法?[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).護(hù)理學(xué)分冊(cè);2004年10期

6 鄒戈;腫瘤血管生成與抗血管生成研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).泌尿系統(tǒng)分冊(cè);2003年01期

7 王國(guó)慶,易成;中藥與血管生成的研究進(jìn)展[J];微循環(huán)學(xué)雜志;2003年01期

8 丁志山,沃興德;中藥對(duì)血管生成影響的研究進(jìn)展[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志;2002年03期

9 曹健,郭德玉,張恩娟;血管生成與疾病治療[J];中國(guó)藥房;2001年07期

10 方栩;;銀屑病外周血單—核細(xì)胞的血管生成能力[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).皮膚病學(xué)分冊(cè);1987年01期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 林金端;長(zhǎng)鏈非編碼RNA UBE2CP3在肝細(xì)胞癌血管生成中的作用及機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

2 王新志;告達(dá)庭誘導(dǎo)凋亡和抗血管生成抑制人腦膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2018年

3 范明君;長(zhǎng)鏈非編碼RNA TUG1通過(guò)上調(diào)LRG1促進(jìn)卵巢癌血管生成的研究[D];山東大學(xué);2019年

4 宋虹瑾;速激肽Hemokinins促血管生成和手性小分子化合物抗腫瘤活性研究[D];蘭州大學(xué);2012年

5 張仁文;人胃癌細(xì)胞中miR-574表達(dá)調(diào)控及其促血管生成機(jī)制的研究[D];吉林大學(xué);2017年

6 陳剛;川芎嗪對(duì)大鼠膠原性關(guān)節(jié)炎血管生成與巨噬細(xì)胞分泌VEGF的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2005年

7 孟繁平;Raf-1在胃癌及其血管生成中的作用及分子機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

8 鄧勇;整合素α_vβ_3受體抑制劑的分子設(shè)計(jì)、合成及生物學(xué)活性研究[D];四川大學(xué);2001年

9 鄭國(guó)靜;消痰散結(jié)方調(diào)控誘導(dǎo)型一氧化氮合酶表達(dá)抗胃癌血管生成的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2005年

10 王心華;力達(dá)霉素和大黃素的抗血管生成和抗轉(zhuǎn)移作用及其機(jī)制研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2001年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 張丹;Sapylin（OK-432）在體內(nèi)和體外對(duì)炎癥反應(yīng)和血管生成的影響的研究[D];華中科技大學(xué);2019年

2 楊喜燕;ELB對(duì)乳腺癌的抗血管生成及生長(zhǎng)抑制作用研究[D];鄭州大學(xué);2019年

3 胡澄;OP-B抑制NSCLC血管生成及遷移侵襲的相關(guān)機(jī)制[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2019年

4 葛喬楓;KPNA2對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞增殖和血管生成的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2019年

5 吳湘光;子宮頸鱗癌細(xì)胞外泌體介導(dǎo)miR-221-3p調(diào)節(jié)血管生成的作用機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

6 康恩銘;DNMT1對(duì)MGMT啟動(dòng)子低甲基化狀態(tài)人膠質(zhì)瘤干細(xì)胞血管生成能力調(diào)控研究[D];中國(guó)人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué);2018年

7 鄭繼泰;MiR-222在砷誘導(dǎo)肺癌形成和新的血管形成中的作用機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2014年

8 張晨曦;千層紙素A抑制YAP/HIF-1α信號(hào)通路抗肝纖維化中血管生成的機(jī)制研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2018年

9 張浩;重組PTHrP 87-139蛋白治療小鼠心肌梗死的實(shí)驗(yàn)研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2017年

10 李香香;IL-17促進(jìn)肺癌血管生成作用的研究及其機(jī)制探討[D];吉林大學(xué);2017年

本文編號(hào)：2865959