發(fā)布時間：2020-11-05 00:47

　　 過敏性疾病是機體受到抗原刺激引起的組織功能紊亂的病理性免疫反應,最終導致炎癥以及組織損傷,具有發(fā)作迅速、反應強烈等特點。肥大細胞在過敏性疾病的發(fā)生中發(fā)揮著重要的作用,當抗原重復攻擊機體時,抗原被抗原遞呈細胞處理后遞呈給B細胞,促使B細胞分泌抗原特異性IgE抗體,其能夠與肥大細胞表面的受體FCεRI結(jié)合,導致過敏反應發(fā)生。目的:探究雙去甲氧基姜黃素對DNP-IgE/HSA誘導的肥大細胞系RBL-2H3細胞脫顆粒的影響;對OVA誘導的小鼠過敏性鼻炎模型、Compound 48/80誘導的小鼠過敏性休克模型、OVA誘導的小鼠主動性系統(tǒng)免疫性疾病模型的影響。方法:體外實驗:1.建立DNP-IgE/HSA誘導的RBL-2H3細胞脫顆粒模型探究不同細胞密度、DNP-IgE濃度、DNP-IgE刺激時間、DNP-HSA濃度對RBL-2H3細胞脫顆粒模型建立的影響。2.探究姜黃素類化合物對RBL-2H3脫顆粒模型的細胞活力的影響使用上述步驟確定的最佳刺激條件,確定姜黃素類化合物(姜黃素、去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃素)各劑量組對DNP-IgE/HSA誘導的RBL-2H3細胞脫顆粒模型細胞增殖能力的影響。3.探究姜黃素類化合物對RBL-2H3脫顆粒模型脫顆粒程度的影響(1)使用上述步驟確定的最佳刺激條件,確定姜黃素類化合物(姜黃素、去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃素)各劑量組對DNP-IgE/HSA誘導的RBL-2H3細胞脫顆粒模型釋放脫顆粒標志物β-氨基己糖苷酶(β-HEX)的影響。(2)使用甲苯胺藍染色法觀察上述受試物對細胞脫顆粒程度的影響。(3)使用鬼筆環(huán)肽對細胞膜進行染色,觀察受試物對細胞膜重構(gòu)的影響。體內(nèi)實驗:1.對OVA誘導的小鼠過敏性鼻炎模型的影響(1)觀察每天攻擊后小鼠的抓鼻次數(shù)。(2)收集血清,測定其中OVA特異性IgE水平。(3)制作病理切片,分別使用HE、甲苯胺藍染色,觀察鼻黏膜組織學改變及肥大細胞脫顆粒程度。2.對Compound 48/80誘導的小鼠過敏性休克模型的影響腹腔給予Compound 48/80后,觀察75min內(nèi)各組別小鼠的存活率。3.對OVA誘導的小鼠主動性系統(tǒng)免疫疾病模型的影響最后一次攻擊后,測定80min內(nèi)各組別小鼠直腸溫度變化。結(jié)果:體外實驗:1.DNP-IgE/HSA誘導的RBL-2H3細胞脫顆粒模型的建立最終確定實驗條件為:將RBL-2H3以6×10~5個/mL鋪于48孔板,貼壁過夜后,棄去上清,加入100ng/mL的DNP-IgE刺激12h后,棄去上清,加入250ng/mL的DNP-HSA激發(fā)1h后,冰浴10min終止反應,300×g離心10min后,吸取上清50μL加入底物50μL作用1.5h后,測定405nmOD值。2.對RBL-2H3脫顆粒模型的細胞活力的影響姜黃素類化合物(姜黃素、去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃素)的各劑量組(6.3μM~73μM)均未降低DNP-IgE/HSA誘導的RBL-2H3細胞脫顆粒模型的細胞活力。3.對RBL-2H3脫顆粒模型脫顆粒程度的影響(1)對肥大細胞脫顆粒標志物β-HEX水平的影響姜黃素、去甲氧基姜黃素、雙去甲氧基姜黃素各劑量組均能夠一定程度的降低β-HEX釋放率(OD405nm)。經(jīng)計算,抑制RBL-2H3細胞釋放β-HEX IC50分別為姜黃素99.47μM、去甲氧基姜黃素30.15μM、雙去甲氧基姜黃素19.27μM。(2)對肥大細胞脫顆粒程度的影響雙去甲氧基姜黃素能夠抑制DNP-IgE/HSA誘導的RBL-2H3細胞形狀的改變,并能夠降低紫色顆粒的釋放。(3)對肥大細胞膜重構(gòu)的影響雙去甲氧基姜黃素能夠抑制DNP-IgE/HSA誘導的RBL-2H3細胞膜重構(gòu),進而抑制肥大細胞脫顆粒。體內(nèi)實驗:1.對OVA誘導的小鼠過敏性鼻炎模型的影響(1)雙去甲氧基姜黃素能夠顯著抑制OVA誘導的過敏性鼻炎小鼠抓鼻次數(shù)(P0.05)。(2)雙去甲氧基姜黃素能夠顯著降低OVA誘導的過敏性鼻炎小鼠血清中OVA特異性IgE水平(P0.05)。(3)雙去甲氧基姜黃素能夠顯著抑制OVA誘導的過敏性鼻炎小鼠鼻黏膜組織學改變,及肥大細胞脫顆粒。2.對Compound 48/80誘導的小鼠過敏性休克模型的影響雙去甲氧基姜黃素能夠顯著增加Compound 48/80誘導的過敏性休克模型小鼠的存活率(P0.05)。3.對OVA誘導的小鼠主動性系統(tǒng)免疫疾病模型的影響雙去甲氧基姜黃素顯著抑制OVA誘導的主動性系統(tǒng)免疫疾病小鼠的直腸溫度降低(P0.05)。結(jié)論:1.姜黃素類化合物中,雙去甲氧基姜黃素對IgE誘導的肥大細胞激活抑制作用最強,其能夠顯著降低肥大細胞的脫顆粒程度。2.雙去甲氧基姜黃素抑制肥大細胞介導的過敏性疾病,包括OVA誘導的小鼠過敏性鼻炎、Compound 48/80誘導的小鼠過敏性休克以及抑制OVA誘導的小鼠主動性系統(tǒng)免疫疾病。
【學位單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R96
【文章目錄】：
中文摘要
abstract
縮略詞表
第1章 前言
    1.1 過敏性疾病概述
    1.2 肥大細胞與過敏性疾病
        1.2.1 肥大細胞的發(fā)育與分化
        1.2.2 肥大細胞的激活
        1.2.3 IgE介導的肥大細胞激活的分子機制
    1.3 抗過敏藥物研究進展
        1.3.1 抗組胺藥物
        1.3.2 肥大細胞穩(wěn)定劑
        1.3.3 鈣劑
        1.3.4 免疫抑制劑
        1.3.5 天然化合物
    1.4 姜黃素類化合物的研究進展
        1.4.1 抗腫瘤作用
        1.4.2 抗炎作用
        1.4.3 抗氧化作用
        1.4.4 神經(jīng)保護作用
        1.4.5 保護肺損傷
        1.4.6 抗代謝性疾病
        1.4.7 肝保護作用
        1.4.8 抗過敏作用
第2章 DNP-IgE/HSA誘導RBL-2H3脫顆粒模型的建立
    2.1 材料
        2.1.1 細胞
        2.1.2 試劑及藥物
        2.1.3 主要儀器
    2.2 方法
        2.2.1 細胞濃度的確定
        2.2.2 DNP-IgE致敏條件的確定
        2.2.3 DNP-HSA攻擊條件的確定
        2.2.4 統(tǒng)計學分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 DNP-IgE致敏條件的確定
        2.3.2 DNP-HSA致敏條件的確定
第3章 姜黃素類化合物對DNP-IgE/HSA誘導RBL-2H3脫顆粒模型的影響
    3.1 材料
        3.1.1 細胞
        3.1.2 試劑
        3.1.3 主要儀器
        3.1.4 實驗藥品
    3.2 方法
        3.2.1 對脫顆粒模型的細胞活性的影響
        3.2.2 對細胞脫顆粒模型β-HEX釋放率的影響
        3.2.3 對細胞脫顆粒模型脫顆粒程度的影響。
        3.2.4 對細胞膜重構(gòu)的影響
        3.2.5 統(tǒng)計學分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 對脫顆粒模型的細胞活性的影響
        3.3.2 對脫顆粒模型β-HEX釋放率的影響
        3.3.3 對細胞脫顆粒模型脫顆粒程度的影響。
        3.3.4 對細胞膜骨架F-actin重構(gòu)的影響
第4章 雙去甲氧基姜黃素對肥大細胞介導的過敏性疾病的影響
    4.1 材料
        4.1.1 動物
        4.1.2 試劑
        4.1.3 主要儀器
        4.1.4 實驗藥品
    4.2 方法
        4.2.1 OVA誘導的過敏性鼻炎
        4.2.2 Compound48/80誘導過敏性休克
        4.2.3 OVA誘導的主動性系統(tǒng)免疫疾病
        4.2.4 統(tǒng)計學分析
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 對OVA誘導的過敏性鼻炎的影響
        4.3.2 對Compound48/80誘導過敏性休克的影響
        4.3.3 對OVA誘導的主動性系統(tǒng)免疫疾病的影響
    結(jié)論
參考文獻
作者簡介及在學期間所取得的科研成果
致謝

【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 王化龍;李振虎;徐硯通;;中藥治療過敏性疾病的藥理作用研究進展[J];中草藥;2015年10期

2 Masashi Kanai;;Therapeutic applications of curcumin for patients with pancreatic cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2014年28期

本文編號：2870857