發(fā)布時(shí)間：2020-12-05 10:50

　　目的選擇斑馬魚(yú)作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,研究阿霉素(doxorubicin,DOX)對(duì)其abcb4基因表達(dá)的影響,進(jìn)一步了解abcb4基因在斑馬魚(yú)多藥耐藥機(jī)制中可能的作用。方法分別以2mL/L二甲基亞砜(DMSO),10μmol/L DOX及含2mL/L DMSO的10μmol/L DOX對(duì)斑馬魚(yú)胚胎進(jìn)行藥物處理,另以Eggwater處理的胚胎作為對(duì)照組。將正常發(fā)育的4~16個(gè)細(xì)胞期斑馬魚(yú)胚胎,隨機(jī)分入以上各組中,藥物處理至120hpf。收集藥物處理下的斑馬魚(yú)不同時(shí)期胚胎運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和胚胎原位雜交技術(shù),檢測(cè)abcb4基因在斑馬魚(yú)中的表達(dá)變化情況。結(jié)果相較于對(duì)照組,藥物處理的斑馬魚(yú)胚胎abcb4基因mRNA表達(dá)水平升高(P<0.05),而abcb5基因mRNA表達(dá)情況則無(wú)明顯變化。通過(guò)斑馬魚(yú)胚胎原位雜交,均在斑馬魚(yú)120hpf胚胎小腸部位發(fā)現(xiàn)有abcb4基因陽(yáng)性雜交信號(hào),且藥物處理的斑馬魚(yú)胚胎在腦及心臟部位發(fā)現(xiàn)abcb4基因陽(yáng)性雜交信號(hào)。結(jié)論 DOX能誘導(dǎo)斑馬魚(yú)胚胎abcb4基因表達(dá)水平增高,對(duì)闡明abcb4基因在斑馬魚(yú)多藥耐藥產(chǎn)生機(jī)制中的作用具有重要意義。 

【文章來(lái)源】：四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2016年01期 第7-13頁(yè) 北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、菌株及質(zhì)粒
    1.2 試劑及酶類(lèi)
    1.3 胚胎收集
    1.4 阿霉素藥物處理
    1.5 abcb4和abcb5基因表達(dá)測(cè)定
    1.6 斑馬魚(yú)abcb4基因片段克隆
    1.7 斑馬魚(yú)abcb4基因探針重組質(zhì)粒構(gòu)建
    1.8 地高辛標(biāo)記的abcb4基因探針制備
    1.9 斑馬魚(yú)原位雜交
    1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 DOX對(duì)斑馬魚(yú)胚胎abcb4、abcb5基因的影響
    2.2 斑馬魚(yú)abcb4基因RT-PCR結(jié)果
    2.3 斑馬魚(yú)abcb4基因探針重組質(zhì)粒酶切和測(cè)序鑒定結(jié)果
    2.4 斑馬魚(yú)原位雜交結(jié)果
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