發(fā)布時間：2020-05-09 21:03

【摘要】：【研究目的】Notch信號通路是一個非常保守的信號通路,在多種生命過程種發(fā)揮著重要的作用。在哺乳動物細(xì)胞中,Notch信號通路由四種受體(Notch1-4)和5種配體(DLL1、DLL3、DLL4、Jagged1和Jagged2)組成。近年來的研究發(fā)現(xiàn)DLL4參與調(diào)控腫瘤血管生成,阻斷DLL4信號通路雖然可以抑制腫瘤生長,但有可能導(dǎo)致血管瘤。所以,我們擬研究Delta配體家族的另一個成員DLL1對腫瘤血管的調(diào)節(jié)作用及其機制�！狙芯糠椒ā课覀冇媚孓D(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染的方法構(gòu)建過表達(dá)DLL1的乳腺癌細(xì)胞系(EO771)、肺癌細(xì)胞系(LAP0297)和轉(zhuǎn)入空載質(zhì)粒載體的對照細(xì)胞系。在C57BL/6小鼠構(gòu)建原位乳腺癌模型和FVB小鼠構(gòu)建肺癌模型,記錄腫瘤生長曲線。在腫瘤長到一定大小時,取出腫瘤組織,應(yīng)用免疫組化分析腫瘤血管的形態(tài)與功能,利用流式分析儀檢測腫瘤浸潤免疫細(xì)胞的組成、表型和活性,通過q PCR檢測相關(guān)基因表達(dá)情況。此外,通過體內(nèi)去除特定T淋巴細(xì)胞來研究DLL1影響腫瘤血管形成的機制。【研究結(jié)果】我們利用慢病毒轉(zhuǎn)染的方法成功構(gòu)建了過表達(dá)DLL1的乳腺癌細(xì)胞系(EO771)、肺癌細(xì)胞系(LAP0297)和轉(zhuǎn)入空載質(zhì)粒載體的對照細(xì)胞系。動物實驗結(jié)果顯示,與空載對照相比,在腫瘤細(xì)胞中過表達(dá)DLL1能夠抑制腫瘤生長,甚至導(dǎo)致部分腫瘤變小消失。高表達(dá)DLL1能夠增加CD8~+T淋巴細(xì)胞的腫瘤浸潤并提高其分泌IFNγ的功能。此外,高表達(dá)DLL1還能夠促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M1型極化。而且,高表達(dá)DLL1降低了血管的密度,增加了周細(xì)胞的覆蓋率和提高了血管的功能,說明高表達(dá)DLL1可以誘導(dǎo)腫瘤血管正常化。體內(nèi)單獨去除CD8~+T淋巴細(xì)胞能逆轉(zhuǎn)DLL1對腫瘤生長的抑制作用和對腫瘤血管功能的促進(jìn)作用,但不影響腫瘤血管的密度。同時去除CD8~+T和CD4~+T淋巴細(xì)胞可以逆轉(zhuǎn)DLL1對腫瘤生長的抑制作用及其對腫瘤血管密度與功能的影響�！窘Y(jié)論與意義】在腫瘤微環(huán)境中增加DLL1的表達(dá)可以促進(jìn)CD8~+T細(xì)胞的腫瘤浸潤與分泌IFNγ,誘導(dǎo)腫瘤血管正�；�和抑制腫瘤生長。CD8~+T細(xì)胞介導(dǎo)了高表達(dá)DLL1對腫瘤生長的抑制作用,而DLL1對腫瘤血管的調(diào)控作用是通過CD8~+T和CD4~+T細(xì)胞來共同實現(xiàn)的。這些研究結(jié)果提示DLL1有望成為腫瘤免疫治療的一個新靶點。
【圖文】：

DLL1基因的PCR產(chǎn)物及質(zhì)粒酶切鑒定瓊脂糖凝膠電泳圖

qRT-PCR及westernblot檢測EO771腫瘤細(xì)胞DLL1的表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R730.2

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本文編號：2656731