發(fā)布時間：2024-07-05 02:14

　　研究背景與目的肺癌是最常見的惡性腫瘤,其中非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)約占原發(fā)性肺癌的85%左右。早期非小細(xì)胞肺癌的預(yù)后較好,但在臨床工作中大多數(shù)就診的患者已處于疾病的晚期。目前臨床上尚無能夠有效檢測非小細(xì)胞肺癌的生物標(biāo)志物。外泌體(exosomes)是細(xì)胞釋放的,直徑在40-150nm的細(xì)胞外囊泡,其內(nèi)包裹的核酸和蛋白質(zhì)能夠反應(yīng)細(xì)胞的內(nèi)在變化,并且在疾病的發(fā)生進(jìn)展中起著重要作用。本研究嘗試鑒別在非小細(xì)胞肺癌尤其是早期非小細(xì)胞肺癌與健康人群差異表達(dá)的exosomal微小RNA(microRNA),篩選出可作為診斷早期非小細(xì)胞肺癌的生物標(biāo)志物。方法首先分析課題組前期血清及細(xì)胞上清exosomes測序結(jié)果,篩選出在肺癌exosomes中顯著差異表達(dá)的microRNA。進(jìn)一步使用Exoquick外泌體分離試劑盒提取血清中的exosomes,通過實(shí)時熒光定量PCR分析非小細(xì)胞肺癌與健康對照組血清exosomes中microRNA的表達(dá)差異,通過計(jì)算受試者工作特征曲線(ROC曲線)評價(jià)候選生物標(biāo)志物的診斷效能。通過實(shí)時熒光定量PCR觀察潛在microRNA在肺癌組織以及肺癌細(xì)胞中的表達(dá)水平。采用細(xì)...

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
第一部分 Exosomal microRNA-744-5p是NSCLC的生物標(biāo)志物
    1 引言
    2 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        2.1 主要試劑
        2.2 主要耗材
        2.3 主要儀器
    3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 入組標(biāo)準(zhǔn)
        3.2 血清樣品收集以及預(yù)處理
        3.3 血清exosomes分離
        3.4 Exosomes RNA提取
        3.5 qPCR定量檢測microRNA
        3.6 統(tǒng)計(jì)分析
    4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.1 臨床標(biāo)本基本信息
        4.2 差異表達(dá)exosomal microRNA的初步驗(yàn)證
        4.3 Exosomal microRNA-744-5p的診斷效能評價(jià)
        4.4 Exosomal microRNA-744-5p是診斷早期非小細(xì)胞肺癌的生物標(biāo)志物
    5 討論
第二部分 microRNA-744-5p在肺癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲中的作用
    1 引言
    2 實(shí)驗(yàn)材料和試劑
        2.1 實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞株
        2.2 主要試劑
        2.3 主要耗材
        2.4 主要儀器
    3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 肺癌組織標(biāo)本收集
        3.2 非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的復(fù)蘇、傳代和凍存
        3.3 腫瘤組織和細(xì)胞系中總RNA提取
        3.4 qRCR定量檢測microRNA
        3.5 細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)
        3.6 統(tǒng)計(jì)分析
    4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.1 microRNA-744-5p在非小細(xì)胞肺癌組織中高表達(dá)
        4.2 microRNA-744-5p在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中高表達(dá)
        4.3 microRNA-744-5p促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌的增殖能力
        4.4 microRNA-744-5p促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌的遷移和侵襲能力
    5 討論
全文總結(jié)
    一、主要結(jié)果與創(chuàng)新之處
    二、后續(xù)工作計(jì)劃
參考文獻(xiàn)
英文縮略詞表
個人簡介及成果
致謝



本文編號：4000881