發(fā)布時(shí)間：2024-07-07 09:14

　　腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞是浸潤(rùn)于腫瘤組織中的一類巨噬細(xì)胞,也是腫瘤微環(huán)境中最多的免疫細(xì)胞。在結(jié)直腸癌的環(huán)境中,巨噬細(xì)胞不僅浸潤(rùn)于腫瘤微環(huán)境中,也暴露于腸道的復(fù)雜環(huán)境中,表現(xiàn)出極大的異質(zhì)性。我們通過單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù),解析結(jié)直腸癌微環(huán)境中腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的圖譜,以研究巨噬細(xì)胞的異質(zhì)性。我們通過AOM/DSS誘導(dǎo)ApcMin雜合子小鼠,成功構(gòu)建了小鼠炎癥相關(guān)的結(jié)直腸癌腫瘤模型。我們通過酶消化法,制備不同組織的單細(xì)胞懸液。我們首先對(duì)小鼠腫瘤和癌旁組織進(jìn)行單細(xì)胞測(cè)序,后利用流式細(xì)胞術(shù)分選出腫瘤中CD11b+髓系細(xì)胞,再進(jìn)行單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,共得到六組數(shù)據(jù)。通過對(duì)六組數(shù)據(jù)的分別分析以及合并分析,研究其基因表達(dá)特征,通過可視化方法分析,展示了細(xì)胞簇之間的異質(zhì)性,并發(fā)現(xiàn)巨噬細(xì)胞簇主要來源于單核細(xì)胞。我們還表征了兩個(gè)CX3CR1+的巨噬細(xì)胞細(xì)胞亞群,其表達(dá)特征與單核細(xì)胞來源的結(jié)腸巨噬細(xì)胞的極化特征相似。分析表明許多巨噬細(xì)胞簇同時(shí)表達(dá)M1型和M2型巨噬細(xì)胞的基因標(biāo)記,處于M1/M2細(xì)胞型的中間狀態(tài)。按照Vegfa的表達(dá)水平可以將巨噬細(xì)胞簇為高、中、低三類。Vegfa表達(dá)高的細(xì)胞簇除了表達(dá)巨噬細(xì)胞簇的特征分子也...

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖2-1AOM/DSS誘導(dǎo)小鼠周期

哈爾濱工業(yè)大學(xué)理學(xué)碩士學(xué)位論文-13-12000xg離心1分鐘，洗脫DNA，后測(cè)DNA的濃度。后進(jìn)行PCR鑒定小鼠的基因型。(7)基因鑒定體系如表2-1，PCR參數(shù)如表2-2。引物序列如下。F:CATCTGCGAGATGATTTGTGAGR:TTTCTTTGTGCTGAACTTG....

圖2-2AOM/DSS誘導(dǎo)過程中小鼠的體重變化(n=6)

哈爾濱工業(yè)大學(xué)理學(xué)碩士學(xué)位論文-16-2.3.6細(xì)胞的流式細(xì)胞分選(1)流式細(xì)胞分選，每組需要設(shè)置空白對(duì)照。實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行抗體標(biāo)記處理。(2)500xg4℃離心5分鐘，棄上清，加入TruStainFcX抗體，避光孵育10分鐘，封閉掉細(xì)胞表面的Fc受體。每106個(gè)細(xì)胞加入的體積為2μL....

圖2-3ApcMin基因型鑒定凝膠電泳圖

哈爾濱工業(yè)大學(xué)理學(xué)碩士學(xué)位論文-17-PCR擴(kuò)增所得條帶的大小為1191bp。由圖2-3可知擴(kuò)增出條帶位于1000和2000的條帶之間，且條帶位置與陽性對(duì)照一致，則證明該鼠為ApcMin小鼠。圖2-3ApcMin基因型鑒定凝膠電泳圖我們用小鼠的血液，利用其物理參數(shù)，驗(yàn)證CD11b....

圖2-4CD45+CD11b+FSC-SSC流式分析圖

哈爾濱工業(yè)大學(xué)理學(xué)碩士學(xué)位論文-17-PCR擴(kuò)增所得條帶的大小為1191bp。由圖2-3可知擴(kuò)增出條帶位于1000和2000的條帶之間，且條帶位置與陽性對(duì)照一致，則證明該鼠為ApcMin小鼠。圖2-3ApcMin基因型鑒定凝膠電泳圖我們用小鼠的血液，利用其物理參數(shù)，驗(yàn)證CD11b....

本文編號(hào)：4003485