發(fā)布時間：2025-02-05 10:47

　　研究背景和目的:腫瘤細胞的高增殖能力是結直腸癌患者預后不良的主要原因之一。研究表明TAB3和PIM-1在結直腸癌的發(fā)生發(fā)展中,特別是在促進腫瘤的增殖中起重要作用,然而TAB3和PIM-1在結直腸癌中的關系及它們在促進結直腸癌發(fā)生和發(fā)展中的作用仍不清楚。本研究擬先檢測結直腸癌組織中TAB3和PIM-1的表達,并對其相關性進行分析;其次通過體外和體內研究明確TAB3通過調控PIM-1表達對結直腸癌增殖生物學特性的影響;最后探討TAB3調控PIM-1的分子生物學機制。方法:1、運用免疫組織化學、qRT-PCR和Western blot方法檢測180例結直腸癌患者癌組織、癌旁組織中TAB3和PIM-1 mRNA及蛋白的表達水平,并利用散點圖分析兩者的相關性。通過qRT-PCR和Western blot的方法檢測六種不同結直腸癌細胞株中TAB3和PIM-1 mRNA及蛋白的表達水平,并觀察兩者的相關性;2、降低結直腸癌細胞中TAB3的表達,通過qRT-PCR和Western blot方法檢測細胞中PIM-1 mRNA和蛋白表達變化,然后利用平板克隆和EDU兩種實驗觀察正常表達TAB3及沉默TAB3...

【文章頁數(shù)】：98 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
中英文縮略詞表
前言
第1章 結直腸癌組織和細胞中TAB3、PIM-1的表達及其相關性分析
    引言
    材料和方法
        1 材料
        2 細胞培養(yǎng)
        3 蛋白免疫印跡反應(Western blot)
        4 RNA的提取及聚合酶鏈反應(PCR)
        5 ElivisionTMplus免疫組織化學法
        6 統(tǒng)計學分析
    結果
        1 在結直腸癌組織中檢測TAB3與PIM-1的表達情況
        2 TAB3和PIM-1基因在結直腸癌組織中表達的關聯(lián)性分析
        3 結直腸癌細胞株中TAB3和PIM-1的表達情況
    討論
    結論
第2章 TAB3調控PIM-1表達對結直腸癌細胞增殖能力的影響
    引言
    第一節(jié) 通過體外和體內實驗觀察沉默TAB3的表達對PIM-1表達及結直腸癌細胞增殖能力的影響
        材料與方法
            1 材料
            2 細胞培養(yǎng)
            3 shTAB3質粒的構建
            4 RNA的提取及實時熒光定量PCR
            5 蛋白免疫印跡反應(Western blot)
            6 平板克隆實驗步驟
            7 EDU實驗步驟
            8 結直腸癌穩(wěn)轉細胞系構建
            9 動物實驗
            10 統(tǒng)計學分析
            11 TAB3 干擾質粒的篩選
            12 降低結直腸癌細胞中 TAB3 的表達,觀察 PIM-1 的表達變化
    第二節(jié) PIM-1是TAB3調節(jié)結直腸癌細胞增殖的關鍵效應分子
        1 材料
        2 細胞培養(yǎng)
        3 pcDNA3.1(+)-TAB3、pcDNA3.1(+)-PIM-1及shPIM-1重組質粒的構建
        4 RNA的提取及實時熒光定量PCR
        5 蛋白免疫印跡反應(Western blot)
        6 平板克隆實驗步驟
        7 EDU實驗步驟
        8 動物實驗
        9 統(tǒng)計學分析
    結果
        1.PIM-1干擾質粒的篩選
        2.HA-PIM1雙His-TAB3質粒的表達
        3.PIM-1是TAB3介導結直腸癌細胞增殖的關鍵分子
    討論
    結論
第3章 TAB3調控PIM-1表達機制的研究
    引言
    材料和方法
        1 材料
        2 細胞培養(yǎng)
        3. shTAK1質粒的構建
        4 RNA的提取及實時熒光定量PCR
        5 蛋白免疫印跡反應(Western blot)
        6 免疫組織化學(IHC)
        7 熒光素酶報告基因實驗
        8 激光共聚焦免疫熒光實驗
        9 免疫共沉淀
        10 統(tǒng)計學分析
    結果
        1.TAK1干擾質粒的篩選
        2. TAB3通過STAT3通路調控PIM-1的表達進而調控結直腸癌細胞的增殖
        3. 在結直腸癌組織中檢測TAB3與p-STAT3(Tyr705)蛋白的表達情況
        4. TAB3通過與STAT3直接結合而非JAK2調節(jié)STAT3活性
        5. TAB3通過形成TAB3-TAK1復合物激活STAT3信號通路
    討論
    結論
全文總結
致謝
參考文獻
攻讀學位期間的研究成果
綜述
    參考文獻



本文編號：4029716