發(fā)布時間：2025-06-24 05:40

　　 為制備程序性細胞死亡配體1胞外區(qū)多肽及其鼠源性多克隆抗體,根據(jù)UniProtKB數(shù)據(jù)庫中公布的其胞外區(qū)基因序列(標識符:Q9NZQ7-1)和原核表達載體pET-28a(+)Nde I上游和Xho I位點下游的序列,設(shè)計合成帶有同源臂的特異性引物.以合成的PD-L1胞外區(qū)基因為模板,PCR擴增程序性細胞死亡配體1胞外區(qū)基因并將其克隆至pET-28a(+)中,構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-28a(+)-PD-L1-E,轉(zhuǎn)化至大腸桿菌DH5α中,擴增并提取其質(zhì)粒,然后將質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)中進行誘導(dǎo)表達.親和層析鎳柱純化重組蛋白后,經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳和基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜鑒定,確認表達蛋白正確.濃縮換液后用重組蛋白免疫Balb/c品系小鼠制備多克隆抗體,經(jīng)ELISA檢測,成功獲得抗程序性細胞死亡配體1胞外區(qū)血清.該研究對于研發(fā)某些腫瘤伴隨診斷檢測試劑有重要意義.

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材 料
    1.2 主要試劑
    1.3 方 法
        1.3.1 PD-L1胞外區(qū)(PD-L1-E)基因合成、引物設(shè)計與合成
        1.3.2 PD-L1-E擴增、檢測及膠回收
        1.3.3 重組質(zhì)粒pET-28a(+)-PD-L1-E構(gòu)建
        1.3.4 pET-28a(+)-PD-L1-E重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化、His-PD-L1-E重組蛋白預(yù)表達及鑒定
        1.3.5 His-PD-L1-E重組蛋白大量表達、純化及鑒定
        1.3.6 His-PD-L1-E重組蛋白質(zhì)譜鑒定
        1.3.7 小鼠多克隆抗體制備及檢測
2 結(jié) 果
    2.1 PD-L1-E 基因的擴增、重組表達載體的構(gòu)建及鑒定
    2.2 pET-28a(+)-PD-L1-E重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化、表達、純化及鑒定
    2.3 His-PD-L1-E重組蛋白質(zhì)譜鑒定
    2.4 小鼠多克隆抗體制備效果鑒定
3 討 論



本文編號：4052570