發(fā)布時(shí)間：2020-11-20 02:31

　　 背景與目的:Barrett食管(BE)是指食管的一種病理現(xiàn)象,其中伴腸上皮化生者屬于食管腺癌的癌前病變。腸化相關(guān)因子CDX2在Barrett食管中表達(dá)增高,同時(shí)KLF5在Barrett食管中存在異常去乙酰化狀態(tài),本文旨在探討轉(zhuǎn)錄因子KLF5的異常去乙�；癄顟B(tài)對(duì)Barrett食管形成的影響。方法:使用qRT-PCR、western blot和免疫組化法檢測(cè)BE組織中KLF5的表達(dá),免疫共沉淀檢測(cè)乙酰化KLF5的表達(dá)。采用qRT-PCR和western blot檢測(cè)人鱗狀上皮細(xì)胞HET-1A在酸和/或膽汁酸混合物的作用下IL-6、STAT3、KLF5、CDX2的表達(dá)。然后在酸和/或膽汁酸混合物的作用下轉(zhuǎn)染KLF5 siRNA于HET-1A細(xì)胞,western blot檢測(cè)KLF5、CDX2蛋白的表達(dá)。將STAT3過(guò)表達(dá)質(zhì)粒、STAT3-siRNA轉(zhuǎn)染人鱗狀上皮細(xì)胞HET-1A細(xì)胞,采用western blot技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)STAT3蛋白、KLF5蛋白表達(dá)水平的改變。在HET-1A細(xì)胞中轉(zhuǎn)染KLF5過(guò)表達(dá)質(zhì)粒,檢測(cè)KLF5、CDX2蛋白的表達(dá)。轉(zhuǎn)染HDAC1過(guò)表達(dá)質(zhì)粒、P300過(guò)表達(dá)質(zhì)粒于HET-1A細(xì)胞,檢測(cè)乙酰化KLF5的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:與對(duì)照組相比,BE組織中IL-6、STAT3、KLF5、CDX2、HDAC1 mRNA和蛋白表達(dá)均升高,但是乙�；疜LF5水平降低。發(fā)現(xiàn)HET-1A細(xì)胞在酸和/或膽汁酸混合物的作用下IL-6、STAT3、KLF5、CDX2表達(dá)增高,同時(shí)組蛋白去乙酰化酶HDAC-1表達(dá)也增加。KLF5 siRNA可抑制酸和膽汁酸混合物所致的HET-1A細(xì)胞CDX2表達(dá)。Western blot結(jié)果發(fā)現(xiàn)STAT3過(guò)表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HET-1A細(xì)胞后,KLF5表達(dá)也上升;而通過(guò)siRNA沉默HET-1A細(xì)胞STAT3表達(dá)后,則能夠抑制細(xì)胞內(nèi)KLF5蛋白的表達(dá)。在HET-1A細(xì)胞中通過(guò)KLF5過(guò)表達(dá)質(zhì)粒上調(diào)KLF5,對(duì)CDX2表達(dá)無(wú)影響。在HET-1A細(xì)胞中通過(guò)轉(zhuǎn)染HDAC1過(guò)表達(dá)質(zhì)粒后,使用免疫共沉淀及western blot顯示HDAC1蛋白表達(dá)增加,同時(shí)后乙�；�的KLF5水平下降,提示HDAC1表達(dá)增高可抑制KLF5的乙�；�。然后轉(zhuǎn)染P300過(guò)表達(dá)質(zhì)粒后,在P300表達(dá)上升的同時(shí),乙�；�的KLF5水平增加。結(jié)論:在Barrett食管中,STAT3可調(diào)控KLF5的表達(dá),KLF5可能為IL-6/STAT3與CDX2之間的橋聯(lián)分子。KLF5表達(dá)增高及其異常去乙酰化狀態(tài)可能是其調(diào)控鱗狀上皮細(xì)胞表達(dá)CDX2的關(guān)鍵環(huán)節(jié),從而促進(jìn)了Barrett食管(BE)的形成。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2020
【中圖分類】：R571
【部分圖文】：

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文192結(jié)果2.1研究表明KLF5、IL-6、STAT3、CDX2、HDAC1在BE中均高表達(dá)（1）檢測(cè)人BE組織中KLF5的表達(dá)。采用免疫組化法和qPCR檢測(cè)KLF5在BE中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)BE中的KLF5表達(dá)高于鄰近正常食管組織(圖1)。圖1A:免疫組化：KLF5在BE中比鄰近正常食管表達(dá)高a:BE;b:鄰近正常食管（×200）B:qPCR：KLF5在BE中表達(dá)增高Figure1A:Immunohistochemistry:KLF5isexpressedhigherinBEthanadjacentnormalesophagusa:BE;b:adjacentnormalesophagus(×200)B:qPCR:KLF5isincreasedinBE

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文20（2）采用qPCR檢測(cè)IL-6、STAT3、CDX2、HDAC1在BE中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)BE中的IL-6、STAT3、CDX2、HDAC1表達(dá)高于鄰近正常食管組織(圖3)。圖2qPCR檢測(cè)的熔解曲線和擴(kuò)增曲線Figure2MeltingcurveandamplificationcurvedetectedbyqPCR圖3BE與鄰近正常食管中IL-6、STAT3、CDX2、HDAC1mRNA的表達(dá)Figure3ExpressionofIL-6,STAT3,CDX2,HDAC1mRNAinBEandadjacentnormalesophagus

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文20（2）采用qPCR檢測(cè)IL-6、STAT3、CDX2、HDAC1在BE中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)BE中的IL-6、STAT3、CDX2、HDAC1表達(dá)高于鄰近正常食管組織(圖3)。圖2qPCR檢測(cè)的熔解曲線和擴(kuò)增曲線Figure2MeltingcurveandamplificationcurvedetectedbyqPCR圖3BE與鄰近正常食管中IL-6、STAT3、CDX2、HDAC1mRNA的表達(dá)Figure3ExpressionofIL-6,STAT3,CDX2,HDAC1mRNAinBEandadjacentnormalesophagus
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本文編號(hào)：2890806