發(fā)布時(shí)間：2024-07-01 21:29

　　腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor α，TNFα)具有對(duì)某些惡性腫瘤的抑制或殺傷作用，也是致內(nèi)毒素性休克、急性移植物抗宿主病及一些自身免疫病的重要效應(yīng)因子，因此TNFα的改造和TNFα拮抗劑的研究受到各國(guó)學(xué)者的重視。重組TNFα及其拮抗劑(包括抗TNFα單抗、抗TNFα受體單抗、可溶性TNFα受體、TNFα突變體)均已應(yīng)用于臨床并取得了一定的治療效果。但單抗的人源化、重組細(xì)胞因子或受體的純化、不同程度的抗原性及價(jià)格因素等均成為上述制劑在國(guó)內(nèi)應(yīng)用的制約因素。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，小分子細(xì)胞因子模擬物具有細(xì)胞因子受體激動(dòng)劑或拮抗劑的作用，且小分子模擬物因容易合成并能夠給予高濃度、可口服等優(yōu)點(diǎn)使其具有更加廣闊的研發(fā)與應(yīng)用前景。篩選TNFα小分子模擬肽及結(jié)合肽對(duì)于TNFα研究具有重要的意義。本研究包括以下四個(gè)方面： 1、TNFα結(jié)合肽的研究：以rhTNFα為靶對(duì)噬菌體環(huán)七肽庫(kù)進(jìn)行篩選，以尋求可拮抗TNFα活性的小分子短肽。三輪篩選后，隨機(jī)挑選23個(gè)噬菌體克隆經(jīng)ELISA鑒定，其中11個(gè)克隆顯示可與TNFα有較強(qiáng)的結(jié)合，DNA測(cè)序結(jié)果推導(dǎo)氨基酸序列，其中兩個(gè)克隆的氨基...

【文章頁(yè)數(shù)】：92 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1一1噬菌體克隆與rhTNFa的結(jié)合

物加入到rhTNFa包被的酶標(biāo)孔內(nèi)，固相表面的rhTNFa與液相中的th飛NFa競(jìng)爭(zhēng)與噬菌體克隆結(jié)合，以此來(lái)鑒定所篩選的噬菌體克隆是否位點(diǎn)準(zhǔn)確即是否確實(shí)和TNFa結(jié)合(見(jiàn)圖1一2):

圖2一1噬菌體克隆與包被TNFamAb的結(jié)合

試驗(yàn)結(jié)果顯示陽(yáng)性克隆均與TNFamAb具有較強(qiáng)的結(jié)合活性(見(jiàn)圖2一2):

圖2一2TNFamAb與噬菌體克隆的結(jié)合

斷陽(yáng)性噬菌體克隆LCS一7與TNFamAb之間的結(jié)合，借此測(cè)定陽(yáng)性噬菌體克隆是否模擬rFNFa的表位與相應(yīng)的受體結(jié)合。設(shè)定低表達(dá)r1NFa受體的CHO細(xì)胞為陰性對(duì)照。計(jì)算抑制率(見(jiàn)圖2一3):

圖3一1正常包被組噬菌體克隆與TNFa的結(jié)合

No.ofPhageelonesNol一20:Phageelone，No21:unrelatedPhageelone，No22:12一merPePtidelibrary圖3一2甲醛固定組噬菌體克隆與TNFa結(jié)合試驗(yàn)Fig.3一2BindingofrhTNFawith12merPh....

本文編號(hào)：3999210